【摘 要】
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背景:目前,牙髓再生治疗(regenerative endodontic treatment,RET)是一种治疗年轻恒牙牙体牙髓疾病的新方法。牙髓再生治疗是一种利用再生医学和组织工程原理的治疗方法,旨在修复再生功能性活髓。组织工程三大要素即种子细胞、生物支架和生长因子,此外血液供应也极其重要。近年来大量的研究利用干细胞进行牙髓再生,而来源于牙髓的干细胞运用于牙髓再生中具有天然的优势。由于发育时间的
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背景:目前,牙髓再生治疗(regenerative endodontic treatment,RET)是一种治疗年轻恒牙牙体牙髓疾病的新方法。牙髓再生治疗是一种利用再生医学和组织工程原理的治疗方法,旨在修复再生功能性活髓。组织工程三大要素即种子细胞、生物支架和生长因子,此外血液供应也极其重要。近年来大量的研究利用干细胞进行牙髓再生,而来源于牙髓的干细胞运用于牙髓再生中具有天然的优势。由于发育时间的不同,来源于人牙髓的干细胞可分为人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)和人恒牙牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)。SHED和DPSC起源于神经嵴细胞,具有自我更新、克隆形成及多向分化等间充质干细胞特性。同时SHED和DPSC位于血管周围的生态位,一方面可以旁分泌多种血管生成调节蛋白,另一方面在特定微环境下可以分化成血管内皮细胞,从而促进血管生成。尽管有大量关于人牙髓干细胞的研究,但目前大多数的研究聚焦于人牙髓干细胞一般生物学特性及矿化能力的研究,对人乳牙和恒牙牙髓干细胞成血管能力的研究报道相对较少,两者成血管能力的差异未见报道。目的:本实验旨在研究SHED和DPSC一般生物学特性及成血管能力的差异,进而为临床上牙髓再生治疗方法提供实验依据。方法:1.利用组织块酶消化法从人乳牙和年轻恒牙牙髓组织中分离培养SHED和DPSC;流式细胞术检测两种细胞的表面标志物;多向诱导后检测两种细胞的成血管、成脂和成骨分化能力;CCK8法检测两种细胞的增殖能力;划痕试验检测两种细胞的迁移能力。2.将生长状态良好的SHED和DPSC进行成血管方向诱导,利用Matrigel小管形成实验检测诱导后两种细胞类血管样结构的形成情况,运用RT-q PCR和蛋白印迹实验(Western Blot,WB)检测成血管相关因子的表达情况。结果:1.镜下可见SHED和DPSC的形态均呈成纤维细胞样;流式细胞术结果表明两种细胞均低表达造血干细胞标记物,高表达间充质干细胞标记物;多向分化实验结果提示两种细胞均能成骨、成脂和成血管向分化;CCK8结果显示SHED相比DPSC具有更强的增殖能力;划痕试验结果提示SHED相比DPSC具有更强的迁移能力。2.在Matrigel基质胶上,成血管诱导14d的SHED和DPSC均能形成类血管样结构,且SHED形成的血管网眼数、节点数、节段数均高于DPSC;RT-q PCR结果显示在第5d、7d、14d,SHED相比DPSC更高表达成血管相关基因;WB结果显示在第7d、14d,SHED较DPSC更高表达成血管相关蛋白。结论:本实验所分离培养的SHED和DPSC均为间充质来源干细胞,具有多向分化潜能,且SHED较DPSC具有更强的增殖和迁移能力;在成血管诱导下SHED较DPSC具有更强的成血管能力,SHED可作为牙髓再生理想的“种子细胞”。
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