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【目的】构建糖尿病ED大鼠模型,通过阴茎海绵体注射的方式导入miRNA-92a抑制剂,检测大鼠的勃起功能以评估miRNA-92a抑制剂对糖尿病大鼠勃起功能的影响。【方法】采用给8周龄空腹雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ,60mg/kg）的方法构建糖尿病模型。定期检测血糖浓度,并进一步采用阿扑吗啡（APO）试验筛选出糖尿病ED大鼠。将40只SD大鼠随机分为4组（每组10只）,正常对照组（Control组）,糖尿病ED组（DMED组）,阴茎海绵体注射miRNA-92a抑制剂antagomir组（DMED+miRNA-92a antagomir组）,阴茎海绵体注射miRNA-92a抑制剂antagomir control组（DMED+miRNA-92a antagomir control组）。2周后采用电刺激海绵体神经的方法检测各组大鼠海绵体内压（ICP）与平均动脉压（MAP）,并计算ICP/MAP比值,ICP曲线下面积（AUC）来评估大鼠阴茎勃起功能。检测完成后,分离阴茎海绵体组织,将其分成4份,取其中1份,提取组织RNA,检测各组大鼠阴茎海绵体组织中miRNA-92a表达水平,其余组织块妥善保存,以进行后续实验。【结果】STZ诱导大鼠血糖升高12周后,大鼠的血糖水平仍维持在大于16.7mmol/L水平。电刺激海绵体神经评估各组大鼠勃起功能结果显示:与Control组相比,DMED组大鼠ICP/MAP及AUC的数值显著降低,而DMED+miRNA-92a antagomir组比DMED组大鼠明显升高,接近Control组大鼠水平。DMED+miRNA-92a antagomir control组大鼠相比DMED组大鼠无明显变化。DMED组大鼠阴茎海绵体组织中miRNA-92a表达水平显著升高,与Control组相比升高4-5倍,miRNA-92a antagomir可下调miRNA-92a的表达水平,miRNA-92a antagomir control无此作用。【结论】成功构建糖尿病大鼠ED模型,miRNA-92a抑制剂antagomir可以显著改善糖尿病ED大鼠的勃起功能,降低miRNA-92a的表达水平。【目的】在组织水平研究miRNA-92a抑制剂改善糖尿病ED大鼠勃起功能的机制。【方法】取冻存的大鼠阴茎海绵体组织,提取组织的总蛋白或RNA,或者取大鼠阴茎海绵体组织的石蜡包埋切片或冰冻切片,进行本部分实验。使用Western Blot、ELISA等方法检测各组大鼠阴茎海绵体组织中e NOS/NO/c GMP信号通路中关键蛋白的表达水平或浓度;免疫荧光、Western Blot等方法检测各组大鼠阴茎海绵体组织中n NOS的表达水平;Western Blot检测VE-Cadherin、Occludin、Claudin-5等内皮连接蛋白的表达水平;免疫荧光检测内皮细胞表面CD31的表达评估内皮功能;检测各组大鼠阴茎海绵体组织内氧化应激的水平,包括荧光探针检测活性氧（ROS）水平、TBA法检测丙二醛（MDA）浓度、超氧化物歧化酶（SOD）活性、Western Blot检测NADPH氧化酶亚基的表达水平;免疫荧光、Western Blot方法检测各组大鼠阴茎海绵体组织中HO-1蛋白的表达水平。【结果】与Control相比较,DMED组大鼠阴茎海绵体组织中e NOS/NO/c GMP信号通路显著下调,其中e NOS及其磷酸化蛋白p-e NOS（S1177）表达降低,c GMP以及NO含量均明显降低;n NOS表达明显下调,反映海绵体神经功能减弱;VE-Cadherin、Occludin、Claudin-5等内皮连接蛋白表达水平降低,内皮细胞表面CD31荧光强度及荧光面积明显降低;活性氧（ROS）水平、NADPH氧化酶亚基表达水平明显增加,丙二醛（MDA）浓度增加,超氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低,HO-1蛋白水平显著下调,综合反映DMED组大鼠阴茎海绵体组织中氧化应激水平较Control组显著上调。使用miRNA-92a抑制剂antagomir治疗后的DMED大鼠上述指标均有显著改善,而其对照miRNA-92a antagomir control无改善作用。【结论】miRNA-92a抑制剂antagomir可以激活糖尿病ED大鼠阴茎海绵体组织中e NOS/NO/c GMP信号通路,保护海绵体神经功能,保护内皮功能,抑制过度活化的氧化应激水平,从而改善糖尿病ED大鼠的勃起功能。【目的】在细胞水平研究miRNA-92a抑制剂对大鼠内皮细胞的影响,预测并且验证miRNA-92a的靶基因。【方法】使用I型胶原酶消化组织,基质胶铺板进行初始培养的方法原代培养大鼠主动脉内皮细胞,成功培养后使用3-5代内皮细胞进行细胞相关实验。分别使用葡萄糖浓度为5m M和30m M的培养基作为正常糖培养基及高糖培养基,6孔板中培养主动脉内皮细胞,共分为以下几组:a.正常糖培养组（Normal Glucose,NG组）,b.高糖培养组（High Glucose,HG组）,c.HG+miRNA-92a inhibitor组,d.NG+miRNA-92a mimic组,e.HG+miRNA-92a inhibitor+Compound C组。实时荧光定量PCR方法检测各组内皮细胞中miRNA-92a及AMPK两个功能亚基Prkaa1及Prkaa2的表达;Western Blot、免疫荧光、q RT-PCR等方法检测AMPK/e NOS信号通路及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路的表达水平;生物信息学方法预测及验证miRNA-92a的靶基因,构建目的基因3’UTR区报告基因载体,用双荧光素酶报告基因方法验证miRNA-92a的靶基因。【结果】生物信息学方法预测结果得到148个miRNA-92a潜在的靶基因,经KEGG通路富集分析,序列比对,AMPK两个功能亚基Prkaa1及Prkaa2可能是miRNA-92a的靶基因。与NG组比较,HG组内皮细胞中miRNA-92a的表达明显上调,Prkaa1以及Prkaa2的m RNA水平明显降低,AMPK/e NOS以及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路受到明显抑制,NG组内皮细胞中加入miRNA-92a mimic之后,内皮细胞表现出与HG中类似的生物学变化,而使用miRNA-92a inhibitor之后,内皮细胞中上述指标均有所改善,而AMPK抑制剂Compound C可以逆转该改善作用。双荧光素酶报告基因检测,发现Prkaa2是miRNA-92a的靶基因,而Prkaa1不是miRNA-92a的靶基因。【结论】高糖状态下上调的miRNA-92a通过靶向调控Prkaa2,从而抑制大鼠主动脉内皮细胞AMPK/e NOS以及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路,引起内皮功能障碍以及过度活跃的氧化应激水平,miRNA-92a抑制剂对上述指标有改善作用。