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目的： 为了克服恶性肿瘤化疗造成粘膜损伤的严重并发症，本研究首先建立氨甲喋呤致小鼠口腔粘膜损伤模型，观察rhGM-CSF对实验性小鼠口腔粘膜损伤的防治作用，评价rhGM-CSF对临床化疗后口腔溃疡的疗效，并进一步探索rhGM-CSF促进口腔粘膜炎及溃疡愈合的作用机制。 方法： 1．动物实验 按照随机分组的原则将501只小鼠分为8大组：对照组、MTX小剂量组、IDMTX组、MTX大剂量组、IDMTX+GM0组、IDMTX+GM2组、MTX40+CF组、MTX40+CF+GM0组。对照组小鼠一次性腹腔注射生理盐水0．5ml，其余各组行一次性腹腔注射不同浓度MTX 0．5ml；IDMTX+GM0和MTX40+CF+GM0组在用MTX同时行皮下注射rhGM-CSF（0．3ml，5μg／kg．d）；MTX40+CF和MTX40+CF+GM0组在用MTX 12小时后腹腔注射CF（0．5ml，15mg／m2．d）；IDMTX+GM2组在用MTX后第2天皮下注射rhGM-CSF 0．3ml；CF及rhGM-CSF连续使用5天，每日一次。注意潜行穿刺，勿注射过深。从注射MTX或生理盐水后第1天开始杀鼠，每组每天杀2～6只，计划10天将全部昆明小白鼠断颈处死，仔细解剖取下舌、口腔颊部及唇部粘膜，用10％福尔马林固定12～24小时后切片，在光学显微镜下观察小鼠口腔粘膜的病理改变。 2．临床实验选择我院血液科住院病人79例，均在化疗后有不同程度的口腔粘膜溃疡。将其随机分为治疗组（39例）和对照组（40例），分别用rhGM-CSF贴片和普通贴片贴敷口腔溃疡面，观察<WP=9>口腔溃疡愈合情况。 3．体外实验 用体外培养的3～8代的胎儿口腔粘膜成纤维细胞，接种于24孔培养板4×103／孔，置于37℃、5％C02、饱和湿度的孵箱中培养12h，待细胞贴壁后吸出原培养液，加入含不同浓度rhGM-CSF的RPMI-1640，设置rhGM-CSF 0、10、50、80、100、150ng／ml浓度组，继续培养6天，每隔2天换液并加入与前面相同浓度的细胞因子，每实验点复种3孔，用成纤维细胞计数和3H-Tdr掺入法研究不同浓度rhGM-CSF在第2、4、6天对成纤维细胞的增殖及DNA合成的影响。 4．统计学处理 用统计程序包SPMR进行多个率之间的比较，用x2检验进行两个率之间的统计学处理。 结果： 1．中剂量MTX（20～40mg／kg）可引起较高的小鼠口腔粘膜损伤病变率（63．0％）和积分率（19．4～56％），且死亡率较低（小于5％）。 2．注射中剂量MTX的同时或延迟2天皮下注射rhGM-CSF组的小鼠口腔粘膜损伤病变率（30．53％和30．99％）和积分率（19．47％～11 17．25％）比单用中剂量MTX组（55．56％～11 36．31％）明显减少，且溃疡严重程度较轻，二者有显著差别。IDMTX+GM0组小NNh2比例最低（2．11％）。在注射MTX（40mg／kg）的同时用CF和／或rhGM-CSF所出现的口腔粘膜病变率比单用MTX（40mg／kg）减低，且溃疡严重程度减轻，二者相差显著（P<0．01）。 3．治疗组39例血液系统肿瘤化疗后口腔溃疡患者用rhGM-CSF贴片治疗3天有效率89．7％，对照组40例此类患者用普通贴片治疗3天有效率32．5％，两组疗效相差非常显著（p<0．001）。 4．不同浓度rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞的增殖及DNA合成有刺激作用，在80～100ng／ml时成纤维细胞生长达到最佳状态，过高浓度rhGM-CSF的刺激作用反而下降。 结论： 1．中剂量MTX（20～40mg／kg）可以形成较高的小鼠粘膜损伤率，且死亡率较低，可用于MTX粘膜损伤研究。 2．rhGM-CSF可以减少MTX所致口腔粘膜损伤及促进粘膜损伤恢复。<WP=10> 3．rhGM-CSF可以用于治疗恶性肿瘤化疗后的口腔溃疡。 4．rhGM-CSF能在体外促进胎儿口腔粘膜成纤维细胞的增殖及DNA合成。本实验条件下，最佳浓度为80～100ng／ml。 5．rhGM-CSF可全身或局部给药用于治疗化疗后口腔粘膜损伤。