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本文以BHK-21细胞为对象,通过系列体外细胞试验,研究类人胶原蛋白-Ⅰ(Human-likeCollagen-Ⅰ,HLC-Ⅰ)对细胞生长的影响。主要研究内容:
1.类人胶原蛋白-Ⅰ对BHK-21细胞生长的促进作用。取BHK-21细胞培养,消化传代,测定其生长曲线。以各浓度类人胶原蛋白HLC-Ⅰ作用于细胞,在不同时间段(24hr,48hr,72hr,96hr,120hr)分别做MTT检测,胎盘兰染色,并选取HLC-Ⅰ浓度为0.4‰作用下的细胞做细胞分裂指数测定,研究HLC-Ⅰ对细胞生长的促进作用,实验数据均进行统计学分析。结果表明,类人胶原蛋白-Ⅰ浓度为0.3‰及0.5‰对于MTT检测A490值、增殖率有积极影响,1.3‰时则有消极影响。胎盘兰染色得到细胞存活率,各浓度梯度类人胶原蛋白-Ⅰ对于细胞存活率均无明显影响,显著性因子P>0.05。细胞分裂指数测定结果表明HLC-Ⅰ(0.4‰,w/v)在培养48hr后,对细胞分裂有正面影响。HLC-Ⅰ对于BHK-21细胞系的细胞生长在低浓度范围内有明显的促进作用,对于细胞的存活率则无显著影响,因此推断其具有良好的促细胞生长特性。
2.类人胶原蛋白-Ⅰ的促BHK-21细胞生长机制。HLC-Ⅰ浓度为0.1‰,0.2‰,0.3‰(w/v),作用于细胞24hr,用LDH检测,流式细胞分析,细胞形态学观察,研究HLC-Ⅰ促细胞生长的机制,实验数据均进行统计学分析。结果表明,作用24hr时,HLC-Ⅰ对于细胞培养液中LDH浓度无显著性影响,P<0.05,HLC-Ⅰ(0.1‰,0.2‰,0.3‰,w/v)作用后的细胞凋亡百分数变化不大,进一步作周期分析,HLC-Ⅰ(0.1‰,0.2‰,0.3‰,w/v)作用24hr后也无显著影响,形态学观察反映出HLC-Ⅰ(0.1‰,0.2‰,0.3‰,w/v)对于细胞形态有加长作用。推测作用24hr时,HLC-Ⅰ可能通过影响细胞膜、增强细胞贴壁生长而促进细胞生长。
3.类人胶原蛋白-Ⅰ对BHK-21细胞生长影响的数学模型。根据MTT检测结果作HLC-Ⅰ浓度c及作用时间t对BHK-21细胞生长影响的双参数模型F(c,t)=K(c)/1+(K(c)/N(c)-1)e-u(c)t,R2=0.9632。