环状RNA在狼疮肾炎以及类风湿关节炎外周血的表达谱研究

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第一部分:血浆circRNA002453可能可作为狼疮肾炎新的诊断性生物标记物背景:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种严重的自身免疫性疾病。该病是以产生多种自身抗体,并累及多器官、多系统的弥漫性结缔组织病。狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)是SLE最严重的一种并发症,往往与不良预后有关。研究表明70%的SLE患者合并LN,其中10-30%的LN会发展成终末期肾衰竭,因此早期诊断和治疗可以改善预后。目前还没有研究报道环状RNA(circular RNA,circRNA)与LN之间的关系。目的:观察血浆circRNA是否可反映LN的肾损害以及作为LN的一个新的诊断性的生物标记物。方法:通过芯片分析5例LN、5例SLE不合并LN以及5例健康对照血浆中差异表达的circRNA,然后用59例SLE(其中30例LN,29例SLE不合并LN)、27例健康对照的血浆通过qRT-PCR的方法去验证芯片结果,并且观察circRNA002453在26例类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血浆中的表达。通过Spearman相关分析评估差异表达的circRNA与LN相关临床指标的关系。通过ROC分析评估血浆circRNA002453对LN的诊断价值。结果:验证实验发现,与SLE不合并LN组、健康对照组以及RA组相比,血浆circRNA 002453在LN组的表达显著升高。血浆circRNA 002453在SLE组的表达与RA以及健康对照组相比显著升高。Spearman相关分析发现血浆circRNA002453的表达与24小时尿蛋白以及rSLEDAI评分相关,与C3、C4以及SLEDAI评分不相关。ROC分析发现血浆circRNA 002453对LN的诊断的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.906(95%CI 0.838-0.974,p=0.000),最大约登指数为0.741,对应的cut off值为0.001,诊断的特异性为0.900,敏感性为0.841。结论:血浆上调的circRNA 002453与LN肾损害相关,可反映LN肾损害,并且可能可作为LN新的诊断性的生物标记物。第二部分:类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的环状RNA表达谱研究背景:CircRNA是一类内源性的非编码RNA,具有闭合环状结构。与传统线性RNA相比,circRNA没有3’ployA以及5’帽子结构而形成一个环状结构,可以抵抗RNase R的消化,所以circRNA比一般线性RNA更稳定,更适合作为疾病的生物标记物。目前尚未有文献报道circRNA与RA的关系。目的:确认RA外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)差异表达的circRNA是否对RA具有一定的诊断价值。方法:取5例RA患者和5例健康对照PBMCs,用circRNA芯片技术筛选出差异的circRNA,然后用30例RA患者以及25例健康对照的PBMCs,通过qRT-PCR的方法验证芯片结果,并评估了在RA以及膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)滑膜成纤维细胞中差异表达的circRNA。通过Spearman相关分析评估差异表达的circRNA与RA患者临床指标的关系,通过ROC分析评估差异表达的circRNA对RA的诊断价值。结果:与健康对照相比,验证实验发现5个circRNA(092516、003524、103047、104871以及101873)在RA患者PBMCs中表达升高。与KOA滑膜成纤维细胞相比,circRNA104871在RA滑膜成纤维中表达显著升高。Spearman相关分析发现,5个差异表达的circRNA与反映RA疾病活动度的指标均不相关,p>0.05,包括DAS28评分、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、健康评估问卷(HAQ)。ROC分析发现circRNA104871对RA的诊断意义最大(AUC=0.833,P<0.001),依次是circRNA003524(AUC=0.683,P=0.020),circRNA101873(AUC=0.676,P=0.026),以及circRNA103047(AUC=0.671,P=0.030)。结论:与正常对照相比,在RA患者PBMCs中表达升高的circRNAs(circRNA104871,circRNA003524,circRNA101873 和 circRNA103047)对RA具有一定的诊断价值。
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