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干旱是影响植物生长发育的重要逆境因子。解析干旱胁迫下植物体内的基因表达及信号传导网络调控机制对于阐明植物对逆境的适应性反应及培育耐旱性作物具有重要的理论和现实意义。研究表明,干旱胁迫能够刺激植物体内ABA的产生或积累,通过诱导气孔关闭等耐旱反应在植物的适应性信号传导途径中发挥重要作用。同时,ABA的积累能够激活或抑制许多抗逆相关基因的表达,为植物快速适应干旱胁迫做准备。本研究室通过化学诱变VP14-LUC的转基因拟南芥,筛选到了一个VP14-LUC高表达的可遗传性突变体suv1(suppressor of vp 14-1)。初步研究表明,突变体具有明显的抗旱性。本研究以筛选到得suv1突变体为材料,研究了该突变体的抗旱生理和分子机制,并克隆了SUV1基因。为进一步解析干旱胁迫/ABA信号传导途径的调控组分及其作用机制奠定了基础,也为通过分子育种手段综合提高作物对多种非生物逆境的耐受性提供了理论依据和优良的基因源。
主要研究结果如下:
1.SUV1的突变提高了突变体拟南芥对干旱的耐受性。在干旱胁迫处理下,突变体植株具有更高的种子萌发率,对根的生长影响很小,侧根发育较多,有利于植物体对水分的吸收。
2.SUV1调控ABA的生物合成。SUV1的突变导致了拟南芥体内ABA生物合成关键酶基因AtNCED1的高表达,使突变体内ABA的水平比野生型拟南芥要高,进一步证明了拟南芥suv1突变体具有耐旱能力。
3.SUV1作为负调节因子参与ABA信号传导。SUV1的突变增强了拟南芥在种子萌发、根伸长等生理过程中对ABA的敏感性,导致突变体植株的蒸腾速率降低,增强了突变体植株脱水胁迫下的保水能力。
4.实时荧光定量PCR结果证明,SUV1的突变导致了suv1突变体的AtNCED1高表达,且SUV1本身受干旱胁迫诱导表达;此外,SUV1还通过调节多种逆境/ABA应答相关功能基因RD29A和调节基因CBF3等的表达,参与ABA信号传导和干旱逆境防御反应,从而提高植物耐受干旱等非生物逆境的能力。
5.克隆了全长的SUV1基因,构建了SUV1-GFP表达载体,转化野生型拟南芥并获得了转基因植株,为进一步研究SUV1蛋白的亚细胞定位打下了基础。