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类甜蛋白(thaumatin-like protein,TLP)属于病程相关蛋白的第5家族,因其氨基酸序列与西非雨林中一种灌木(Thaumatococcus daniellii)果实中含有的甜蛋白高度同源而得名。目前类甜蛋白在昆虫、真菌、植物等广泛生物体中发现。类甜蛋白是一组富含半胱氨酸的蛋白质,具有高度稳定性。近年来,由于其抗真菌以及类脂联素活性成为人们研究的热点。permatin蛋白是莜麦中分离到的一种属于病程相关蛋白家族5的类甜蛋白。本文将莜麦中分离到的编码permatin蛋白基因在原核中进行重组表达与纯化。将permation基因分别与编码促溶性标签蛋白、周质表达信号肽等基因融合,最终揭示只有与NusA标签蛋白的融合表达才可实现permatin蛋白原核可溶性表达。利用木霉、尖孢镰刀菌、酵母探究permatin蛋白的抑菌机理。通过带毒平板法分别测定了permatin蛋白对木霉和尖孢镰刀菌的半抑制浓度;接着利用Delta vision显微镜观察了蛋白对木霉孢子萌发及菌丝生长的影响,并对孢子萌发的影响进行统计;进一步结合碘化丙啶染色探究蛋白对真菌菌丝及孢子通透性以及活性氧含量的影响。结果显示permatin蛋白对木霉和尖孢镰刀菌半抑制浓度分别为0.73μM,21.42μM;能够显著的抑制木霉孢子的萌发及菌丝的生长,增加真菌菌丝及孢子细胞膜的通透性,导致尖孢镰刀菌菌丝内活性氧的集聚。采用酿酒酵母为实验材料通过液体悬浮培养法,绘制不同处理组生长曲线法,结合核酸染料DAPI及荧光显微镜观察法,利用DCFH-DA(2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐)检测不同处理酵母细胞内活性氧变化。结果显示CaCl2能够加强permatin蛋白对酿酒酵母生长的抑制作用,促进permatin蛋白对细胞膜壁的裂解破碎及加强细胞中活性氧的生成。