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目的胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,位居我国恶性肿瘤死亡率的前列。目前,尽管胃癌的手术和其他治疗方法都有很大的提高,预后却不令人满意。从分子水平来全面理解胃癌发生进展的机理,并在此基础上寻求有效的防治方法依然是当前胃癌研究的重点和难点。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)在恶性肿瘤侵袭转移中的作用已受到很大的关注。上皮-间质转化指上皮细胞失去极性,转化为成纤维细胞形态,与周围细胞的接触减少,细胞黏附力下降,迁移和运动能力增加。此过程中,上皮细胞标志物如E-钙粘蛋白(E-cadherin)等表达下调,间叶表型标记物如波形蛋白(vimentin)等表达上调。明确EMT在胃癌发生发展中可能的作用及机制,为胃癌的分子干预及临床治疗提供新的途径和方法。近年来,大量研究显示非编码RNA在多种生物学过程中具有重要的调控作用。微RNA (microRNA, miRNA)是非编码RNA家族中被研究得最多的成员,是长约22nt的短链非编码RNA,可与目标RNA部分互补结合,与miRNA结合的序列称为miRNA反应元件(MREs),结合后能够通过促进靶mRNA的降解和(或)抑制其翻译而负性调控基因的表达。人们对miRNA-mRNA的作用已有足够的认识,但关于mRNA-miRNA反向作用却知之甚少。一些非编码转录包括基因非翻译区(untranslated regions, UTRs)作为竞争性RNA通过竞争miRNA池调控肿瘤的发生发展,但其作用机制及影响目前尚不明确。方法本课题分两部分进行：第一部分：以ZEB2为研究对象,脂质体Lipofectamine2000分别将人工合成的ZEB23’UTR质粒及其siRNA转染入人胃腺癌细胞SGC7901,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后miR-200a/b/c的表达,Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力,蛋白印迹(Western blot)方法检测转染后ZEB2及EMT相关指标E-cadherin、Vimentin蛋白的表达水平。第二部分：将人工合成的ZEB23’UTR质粒及miR-200b micmics采用脂质体Lipofectamine2000转染GES-1细胞。RT-PCR检测转染后miR-200a/b/c及ZEB1/ZEB2mRNA的表达；Western blot检测转染后ZEB1/ZEB2、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达；Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力；MTT法检测细胞增殖活性。结果第一部分：Real-time PCR显示ZEB23’UTR转染后,miR-200a/b/c的表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05),以miR-200b最为明显,而siRNA干扰ZEB2基因后miR-200a/b/c表达则均上调。转染ZEB23’UTR质粒组细胞的迁移、侵袭活性均较对照组增强,而转染ZEB2siRNA后,SGC7901细胞的迁移、侵袭则有明显减弱。蛋白印迹法显示ZEB23’UTR转染导致ZEB2表达上调,E-cadherin表达下调,而Vimentin则表达上调,而转染ZEB2siRNA后,各项指标则表现出相反的表达趋势。第二部分：与对照组及突变组相比,转染ZEB23’UTR组miR-200a/b/c的表达均下调,以miR-200b最为明显,ZEB1/ZEB2mRNA及蛋白水平表达上调,细胞迁移、侵袭、增殖活性均增强(P<0.05)。而联合niR-200b micmics组较ZEB23’UTR组迁移、侵袭、增殖活性降低。结论ZEB23’UTR可以通过调控miR-200a/b/c的表达调控胃癌细胞EMT过程,在调节肿瘤细胞的侵袭、转移中具有重要作用。ZEB23’UTR可能通过调控miR-200a/b/c的表达进而影响其对靶基因的转录后调控,增加细胞的侵袭、迁移能力,导致GES-1细胞的恶性转化倾向,为今后胃癌的基因靶向治疗提供新的思路。