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研究目的:研究目的:探讨”靳三针”头穴对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织中BNIP3及LC3/Atg8表达的影响,研究针刺”靳三针”头穴对治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的作用机制,并进一步通过加入自噬通路上游蛋白的激活剂及抑制剂等药物探索其起效通路以及观察针刺通过促进BNIP3介导的线粒体自噬在改善新生儿缺氧缺血性脑损伤中发挥的作用强度,为研究新生儿缺氧缺血性脑病的机制研究及临床诊治提供客观科学依据。研究方法:用异氟烷麻醉孕21天母鼠,剖宫后钳夹孕鼠双侧子宫动脉,完全阻断血流供应10 min后娩出小鼠促醒,抢救成功小鼠由代乳鼠喂养至D14,苦味酸标记后称重,分层随机分为模型组,针刺组,激活剂组,抑制剂组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组六个分组。针刺组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组均进行针刺干预,其余三组同时进行空抓操作,激活剂组,抑制剂组,针刺加激活剂组,针刺加抑制剂组给予相应药物干预,模型组及针刺组相同时间腹腔注射生理盐水。六组仔鼠出生后第14天开始干预,每天一次,共干预14天,至第28天麻醉后处死取材。每组取3只仔鼠左侧脑组织做电镜检测,右侧脑组织做HE染色,每组取8只仔鼠海马做免疫印迹检测BNIP3及LC3的表达情况。研究结果:1.透射电镜:与模型组相比,针刺组,激活剂组,针刺加激活剂组自噬小体增多,抑制剂组,针刺加抑制剂组减少。2.HE染色:与模型组相比,针刺组及针刺加激活剂组细胞数量增多,且形态改善,激活剂组数量增多,抑制剂组及针刺加抑制剂组细胞数量减少且形态未见明显改善。3.各组蛋白含量检测结果:BNIP3蛋白表达情况:与模型组相比,针刺组的表达增多,有统计学意义(P<0.05);激活剂组未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);抑制剂组表达减少,有统计学意义(P<0.05);与激活剂组相比,针刺加激活剂组表达升高,有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组相比,针刺加抑制剂组未见明显的改变,无统计学意义(P>0.05)。LC3蛋白表达情况:与模型组相比,针刺组的表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);激活剂组未见明显改变,无统计学意义(P>0.05);抑制剂组表达减少,有统计学意义(P<0.05);与激活剂组相比,针刺加激活剂组表达升高,有统计学意义(P<0.05);与抑制剂组相比,针刺加抑制剂组未见明显的改变,无统计学意义(P>0.05)。结论:1、针刺可促进神经细胞内自噬小体的增加,并改善线粒体肿胀破损情况,同时矫正细胞核及各类细胞器形态,自噬激活剂也可以增加自噬小体数量,针刺与激活剂同时存在时可较大程度增加神经细胞内自噬小体数量,促进自噬的产生及发挥自噬的细胞保护功能。抑制剂和针刺加抑制均降低自噬小体表达。2、针刺对神经细胞线粒体自噬的激活作用是通过促进BNIP3及LC3的表达发挥作用的,抑制剂3-MA则通过抑制BNIP3的表达抑制了自噬的过程,继而抑制LC3的表达,使在自噬的通路机制的上游及下游均受到抑制,针刺并不能逆转这种抑制状态,激活剂RAPA其作用靶点为mTOR,在促进自噬的表达上并未通过促进BNIP3的表达发挥促进自噬的作用,针刺加激活剂却可以有效地促进BNIP3及LC3的表达,提示针刺依赖BNIP3介导的线粒体自噬通路发挥促进自噬产生,修复受损神经元,促进脑缺血状态恢复的目的。