MicroRNA-455-5p对于结肠癌中Galectin-9表达影响的机制研究

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第一部分、结肠癌组织中Galectin-9的表达  目的:研究结肠癌组织中Galectin-9的表达,探讨Galectin-9的表达与结肠癌发病的关系。  方法:运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western Blot检测Galectin-9在8例配对结肠癌患者组织中的表达情况。构建Galectin-9过表达载体,运用CCK8实验检测过表达Galectin-9对于HT29细胞体外增殖能力的影响。  结果:Galectin-9在结肠癌癌症组织中的表达低于相应的癌旁组织,两者具有统计学差异(P<0.05),而Western Blot的结果也与实时荧光定量PCR结果一致。过表达Galectin-9可以抑制HT29细胞的体外增殖。  结论:Galectin-9的低表达可能与结肠癌的发生有关。  第二部分、结肠癌组织中MicroRNAs的表达  目的:研究可能靶向Galectin-9的MicroRNAs在结肠癌组织中的表达情况  方法:通过生物学信息数据库预测可以与Galectin-93’UTR区域结合的MicroRNAs,并运用实时荧光定量PCR检测各个MicroRNAs在8例结肠癌患者组织中的表达情况。  结果:通过生物学信息数据库预测:miR-22、miR-296-3p、miR-455-5p、miR-491-5p四种MicroRNAs可以通过碱基互补配对的方式与Galectin-93’UTR区域结合且分数较高。而在结肠癌组织中,miR-455-5p在癌症组织中的表达高于相应的癌旁组织,两者具有统计学差异。(P<0.05)。  结论:miR-455-5p可能可以靶向调控Galectin-9,其高表达可能与结肠癌的病理过程有关,是结肠癌的一个致癌因子。  第三部分、miR-455-5p对结肠癌中Gal-9表达的影响  目的:探索miR-455-5p是否可以与Galectin-93’UTR区域特异性的结合并抑制其表达,进而进一步研究这一抑制效应在结肠癌细胞中的应用。  方法:构建Galectin-93’UTR重组质粒和突变型质粒,利用双荧光素酶报告基因实验验证 Gal-93’UTR是否为 miR-455-5p的靶基因。用miR-455-5p mimics转染结肠癌细胞株HT29使其过表达miR-455-5p,通过实时荧光定量PCR和Western Blot检测Galectin-9在细胞中表达的变化,CCK8实验检测HT29细胞体外增殖能力的变化。  结果:双荧光素酶报告基因实验证明,Gal-93’UTR为miR-455-5p的靶基因。实时荧光定量PCR和Western Blot的结果表明,在结肠癌HT29细胞株中,过表达miR-455-5p可以抑制Galectin-9的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCK8实验结果表明,过表达miR-455-5p可以促进HT29细胞的体外增殖。  结论:在结肠癌的发生、发展过程中,miR-455-5p可能可以通过对靶基因Galectin-93’UTR的抑制来促进癌症细胞的增殖,抑制机体的抗肿瘤免疫,从而可以促进结肠细胞的恶性化转变与癌细胞的转移。提示我们miR-455-5p的升高和(或)Galectin-9的降低可以成为结肠癌诊断与预后监测的新靶点,为结肠癌的治疗提供新的思路。
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