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目的:重症急性胰腺炎(severe acute pancereatitis,SAP)为外科危重症,病死率一直居高不下,其发生发展机理的研究也成为外科领域的重点。目前认为SAP不仅是胰腺的局部病变,而是涉及多个脏器改变的全身性疾病,涉及到炎症介质和细胞因子、细胞凋亡、胰腺微循环障碍和肠道细菌移位等[1]。细胞因子网络和免疫功能紊乱在SAP中的作用受到广泛关注,研究主要集中在过激的炎症免疫反应所介导的病理损害和相应的拮抗治疗方面[2]。近年来,国内外报道脾脏在全身多个脏器炎症反应中的研究相继增多,因此研究脾脏在重症胰腺炎中的发病作用就尤为重要。本实验的研究目的就是在观察脾脏淋巴细胞凋亡的同时结合外周血中的血淀粉酶(AMY)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)的水平,探讨其之间的关系,得出脾脏淋巴细胞凋亡在重症胰腺炎中的发病作用。方法:采用对照性实验研究,把SD清洁级大鼠40只,体重在300-350g,雌雄不限(河北联合大学动物中心提供)随机分为对照组(假手术组,SO组)10只、模型组(SAP组),模型组(SAP组)大鼠再分为6h、12h及24h小时三个观察亚组,每组10只。假手术组仅开腹后翻动胰腺后关腹。SAP组模型通过胰胆管逆行注入5﹪牛磺胆酸钠诱导,注射完毕后,以无损伤缝线缝合肠壁穿刺孔处,关闭腹腔,于相应时间点处死大鼠。取血清自动生化分析仪测淀粉酶(amylase,AMY),酶联免疫吸附实验法(ELISA法)检测血清中的ET、TNF-α、IL-6、IL-10水平。大鼠处死后取脾脏组织,每只大鼠称重100mg后即刻检测。分光光度法检测脾脏组织的Caspase-3、Caspase-9活性,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的标记染色(TUNEL法)检测脾脏淋巴细胞的凋亡,计算凋亡指数(AI)及透射电镜观察脾脏的超微结构变化。留取大鼠的胰腺标本行HE染色,并行胰腺组织半定量病理评分。应SPSS13.0统计学分析系统,采用单因素方差分析和直线相关分析,对血清中的ET、TNF-α、IL-6、IL-10水平、Caspase-3、Caspase-9活性的活化倍数及凋亡指数进行统计学处理。取a=0.05为显著性检验标准。凋亡指数的计算方法:高倍镜(40×10倍镜)下选定5个视野,每个视野计数100个细胞,计算其中的凋亡细胞数(AI)所占比例。结果:1.外周血中各指标的变化: SAP组6h、12h、24h与SO组相比,血清AMY、ET、TNF-α、IL-6、IL-10水平三组之间均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),并且各观察亚组间因子水平随着时间的延长,呈逐渐增高的趋势,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。2.脾组织caspase-3活性及caspase-9活性:SAP组6h、12h、24h脾脏组织与SO组的caspase-3及caspase-9的活性水平相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且SAP各组呈逐渐增高趋势,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。3.脾脏凋亡指数:假手术组中偶见凋亡细胞,SAP组中的细胞凋亡随着时间延长,凋亡细胞数增多,且SAP各组的凋亡指数均高于对照组,(P<0.05),差异显著。4.脾脏组织透射电镜观察:SO组没有发现明显的凋亡细胞,6h组可见不典型凋亡细胞,12h偶见典型的凋亡细胞,24h组可见多个典型的细胞凋亡。5.胰腺组织肉眼观察:胰胆管内逆行注射5%牛磺胆酸钠后5min内即可见胰腺充血、肿胀,在6h、12h、24h各时间点处死大鼠留取标本时见大鼠腹腔内有不等量的血性腹水,胰腺体积增大,显紫红色或紫蓝色,部分出现黄色灶性坏死,胰周组织出现不同程度水肿。大网膜、肠系膜上有大量皂化斑形成,胃扩张,并且随时间点推移逐渐加重。6.胰腺组织病理学观察:SO组胰腺腺泡及间质无水肿坏死,小叶结构正常,无炎性细胞浸润;6h组胰腺腺泡及间质均有充血和炎性细胞浸润,小叶分离,随着时间的推移12h及24h胰腺腺泡及间质充血加重,炎性细胞浸润越来越多,小叶分离或缺失。结论:1、在重症急性胰腺炎时,血清ET、TNF-α、IL-6、IL-10水平明显增高,与急性重症胰腺炎的发生及发展程度相关;2、血清ET、TNF-α、IL-6、IL-10可作为评估SAP严重程度及预后的客观指标;3、caspase-3、caspase-9的活性表达与脾脏淋巴细胞凋亡呈正相关;4、在重症急性胰腺炎时,脾脏淋巴细胞的凋亡与重症胰腺炎的病情轻重有相关性。