miR-22和miR-200b对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制研究

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目的:探讨miR-22与miR-200b对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响及分子机制。方法:采用原位杂交实验检测89例胃癌组织及41例癌旁正常组织中miR-22与miR-200b的表达水平;采用荧光素酶报告载体系统检测miR-22和miR-200b对Wnt-13’UTR荧光酶活性的影响;采用Western blot和qRT-PCR检测miR-22和miR-200b对其调控靶基因的蛋白和mRNA表达变化;运用RNA干扰技术沉默人胃癌MGC-803细胞中Wnt-1的表达;采用MTT法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验以及AnnexinV-FITC和PI染色法检测miR-22与miR-200b以及si-Wnt-1对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响。结果:原位杂交结果显示,miR-22与miR-200b在胃癌组织中的表达水平相对比癌旁正常胃粘膜组织明显下调,且两者在胃癌组织中的表达呈正相关;在89例胃癌组织中,miR-22与miR-200b的表达水平与患者的临床分期和淋巴结转移呈负相关;荧光素报告载体系统证实Wnt-1是miR-22和miR-200b直接调控的共同靶基因;Western blot和qRT-PCR结果显示,miR-22和miR-200b能下调Wnt-1的蛋白和mRNA表达水平;MTT检测显示,高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌MGC-803细胞的增殖抑制作用,差异均有统计学意义(P<0.01);划痕实验结果显示,高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803细胞迁移,而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌MGC-803细胞的迁移抑制作用,差异均有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭,而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌MGC-803细胞的侵袭抑制作用,差异均有统计学意义(P<0.01);AnnexinV-FITC和PI染色法检测结果显示,高表达miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可诱导人胃癌MGC-803细胞发生凋亡,而miR-22或miR-200b抑制剂能部分逆转si-Wnt-1对人胃癌MGC-803细胞的促凋亡作用,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:1. miR-22和miR-200b在胃癌中表达下调,并与胃癌临床分期以及淋巴结转移相关。2. Wnt-1是miR-22和miR-200b直接调控的共同靶基因。3. miR-22和miR-200b通过靶向调控Wnt-1抑制人胃癌MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭与诱导凋亡。
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