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唇形科香茶菜属蓝萼香茶菜味苦、甘、性寒,具有清热利尿,活血散瘀,解毒消肿的功效。作为一种传统草药,蓝萼香茶菜具有较好的抗炎作用,广泛用于治疗各种炎症性疾病,如肝炎、胃炎等。已知蓝萼甲素(Glaucocalyxin A,GLA)是蓝萼香茶菜中主要的抗炎活性成分之一,但其抗炎作用机制尚不明确。炎症小体(inflammasomes)是一类由胞浆内模式识别受体(Pattern Recognition Receptors,PRRs)参与组装的蛋白复合物,是人体天然免疫系统的重要组成部分,在多种炎症相关疾病的发生发展过程中都发挥了关键作用。其中NLRP3炎症小体是目前研究最为广泛的炎症小体类型。靶向调控NLRP3炎症小体通路也是多种抗炎药物发挥作用的分子机制,但GLA是否通过调控NLRP3炎症小体通路而实现抗炎作用,目前未见报道。目的本论文拟从分子、细胞、整体动物等层面,考察GLA对NLRP3炎症小体通路的调控作用及机制。采用小鼠感染性休克模型和体外巨噬细胞炎症模型,对蓝萼香茶菜活性成分蓝萼甲素的抗炎药效及作用机制进行初步探究,以期扩大草药蓝萼香茶菜在炎症疾病预防和治疗方面的临床应用,同时也可为蓝萼香茶菜的资源开发和利用提供新的科学依据。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理的小鼠骨髓原代巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs),再给予尼日利亚菌素(nigericin)等刺激构建NLRP3炎症小体的活化模型。当LPS预处理BMDMs后给予GLA,再给予nigericin等刺激,观察GLA对NLRP3炎症小体激活的影响。采用Caspase-Glo~?1 Inflammasome Assay和ELISAs检测细胞培养上清液中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)的活性、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒定量检测细胞活力;采用TUNEL检测试剂盒直观检测NLRP3炎症小体激活导致的细胞凋亡;通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞上清中成熟的IL-1β和caspase-1的产生及细胞裂解液中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a C-terminal caspase recruitment domain,ASC)、pro-caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达。除此之外,利用BMDMs细胞还进一步研究了GLA对poly(dA:dT)刺激的黑色素瘤缺乏因子2(the absent in melanoma 2,AIM2)和沙门氏杆菌(Salmonella)刺激的NOD样受体家族天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活募集结构域4(NOD-like receptor containing a caspase activating and recruitment domain 4,NLRC4)炎症小体激活的影响。通过蛋白质免疫印迹法检测细胞裂解液中NLRP3、pro-IL-1β蛋白的表达来阐释GLA对NLRP3炎症小体及TLR4信号通路的影响;通过免疫荧光法(Immunofluorescence)测定GLA对nigericin导致的线粒体损伤程度的影响,探究GLA对NLRP3炎症小体激活影响的机制;同时在NLRP3炎症小体活化的基础上,通过蛋白质免疫印迹法进一步检测细胞上清中ASC寡聚化的情况及细胞裂解液中ASC的表达,从而阐明GLA对NLRP3炎症小体激活影响的机制。在LPS腹腔注射导致的小鼠感染性休克模型的体内实验中,进一步验证了GLA对于NLRP3炎症小体激活的影响。结果1.蓝萼甲素通过抑制pro-caspase-1剪切,阻断caspase-1 p20剪切pro-IL-1β,而抑制NLRP3炎症小体的激活与细胞焦亡,并且抑制Salmonella诱导的NLRC4炎症小体活化,但对poly(dA:dT)诱导的AIM2炎症小体的活化没有影响;2.蓝萼甲素通过抑制ASC寡聚化来抑制NLRP3、NLRC4炎症小体的激活;3.蓝萼甲素通过抑制NLRP3炎症小体依赖的炎症因子的释放,显著降低LPS诱导的细菌感染引起的死亡率。结论蓝萼香茶菜的活性成分蓝萼甲素对于NLRP3炎症小体活化的巨噬细胞具有保护作用,并且改善了LPS诱导的感染性休克和炎症,明确了蓝萼甲素抗炎的作用及机制,为治疗NLRP3炎症小体介导的炎症相关疾病提供一个具有开发前景的天然活性化合物,也为香茶菜属中草药资源的开发利用与质量控制提供了参考依据。