视网膜前膜(ERMs)是指在严重孔源性或外伤性视网膜脱离时在视网膜表面、视网膜下及玻璃体腔内形成的纤维细胞性膜组织。当膜组织收缩时将使视网膜脱离进一步发展，最终发展为增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的发生，严重损害视功能甚至可致盲。其组织学鉴定发现其主要细胞成份为视网膜色素上皮细胞(RPE)、神经胶质细胞(RG)、成纤维细胞(fibroblasts)和炎症细胞等；临床表现为玻璃体腔内灰白色絮状或团块状混浊；视网膜皱褶，血管扭曲，可发展为全层固定皱褶，严重时视网膜呈漏斗状脱离；周边部视网膜环形皱缩；视网膜下可见条形、树枝状、网状的增殖组织。 目前为止研究体外PVR的细胞行为及发病机制时，最常采用的是单纯人RPE细胞和Müllar细胞或购买细胞株，但二者与病变移位后的细胞无论在表型还是在生物特性上均存在很大的差异，所得到的实验结果与临床实际情况差距较大；而本研究直接对视网膜前膜组织加以培养得到的细胞将在一定程度上弥补以上两者的缺陷，使实验结果更接近于临床实际情况，更能说明临床实际情况。 现代的玻璃体视网膜手术虽可使视网膜脱离及PVR患者达到较高的治愈率，但手术本身并不能阻止PVR的再次发生，原始疾病及手术操作的损伤所导致的血-视网膜屏障的破坏，RPE及视网膜神经胶质细胞向视网膜表面及玻璃体腔内游离，均是再次形成视网膜前膜导致牵拉性视网膜脱离PVR的高危险因素。PVR的早期是炎性反应剧烈和细胞增殖活跃的时期，且这一时期多持续较长可达3个月以上，因此理想的PVR抑制药物应具备减轻血管的渗出降低炎症反应、抑制细胞增殖、持续作用时间长、玻璃体腔局部用药时药物毒性低等特点。而曲安奈德作为一种长效皮质类固醇激素则可满足以上要求，因此成为近年来PVR防治研究的热点药物。 第一章视网膜前膜的体外培养及免疫组化鉴定目的：探讨视网膜前膜组织培养中存在的细胞迁出率低、传代困难等问题及其解决方法；观察培养的前膜细胞的细胞组成成分及在传代过程中细胞表型的改变；同时探讨前膜组织中细胞体外培养迁出率及增殖力与PVR发病时间的相关性。方法：使用DMEM-F12培养基组织块培养法将手术中所剥离的31例D1-D3级的PVR患者视网膜前及视网膜下增殖膜组织进行体外培养；双目倒置显微镜下观察细胞生长状况及活性改变；使用DAB显色法对体外培养的视网膜前膜细胞进行免疫组织化学鉴定。结果：PVR在3个月内的细胞迁出率与＞3个月以上的细胞迁出率(X2=3.876α＜0.05)和细胞传代率(X2=6.626α＜0.05)都有显著性差异；一般在培养的10天内开始有细胞迁出，培养的31例前膜组织中23例有细胞迁出，9例未达到传代标准之前就已逐渐凋亡，14例细胞生长状况良好并进行了细胞传代，8例传至第四代且细胞活性良好；在偏酸性的培养液中细胞生长增殖活性良好；培养所得细胞从形态学上观察多呈长梭形，部分呈多突起的不规则形和哑铃状或伞状。免疫组化鉴定见：s-100、CK标记多数细胞为阳性，Vimt、GFAP标记仅少部分细胞呈阳性反应，CD34标记呈阴性反应。结论：PVR3个月内的患者的视网膜前膜组织中细胞活性良好，是进行视网膜前膜组织体外培养的最佳选材；也是PVR病情进展的急性期，3个月后膜组织增殖力多趋于稳定。培养所得到的细胞成分以视网膜色素上皮细胞为主，并含有少部分成纤维细胞及神经胶质细胞。 第二章曲安奈德体外抑制试验目的：探讨不同浓度曲安奈德对体外培养的视网膜前膜细胞、RPE及神经胶质细胞的抑制率的差异，找出视网膜前膜细胞达最大抑制率时的最低有效药物浓度，并用于指导临床PVR防治时曲安奈德药物浓度的选择。方法：用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度TA对体外培养的视网膜前膜细胞、RPE及神经胶质细胞的作用。结果：三种细胞对TA的反应不完全相同，达最大抑制率时所需要TA的最低有效药物浓度亦不相同，其中视网膜前膜所需浓度≥0.8mg/ml，RPE及视网膜神经胶质细胞所需浓度分别为0.4、0.6mg/ml。抑制率与作用时间的相关性表现为对视网膜前膜细胞的抑制率随药物作用时间的延长而明显上升，RPE则轻度上升，视网膜神经胶质细胞的抑制率则与药物作用时间的长短无明显的相关性。结论：TA能够有效抑制体外培养的视网膜前膜细胞、RPE细胞及神经胶质细胞的增生；视网膜前膜所需TA药物浓度明显高于RPE和神经胶质细胞，故临床使用时应在在安全浓度的范围内应适当加大给药剂量，以期获得更好的治疗效果。