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目的:1、建立体外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)高糖损伤模型,使用不同浓度的西格列汀干预后观察细胞HMGB1(High mobility group box 1)、PI3K(Phosphatide 3-kinases)、Akt(Protein kinase B)、mTOR(Mammalian target of rapamycin)、P62(Sequestosome 1)、LC3-II(Microtubuleassoeiated protein 1 light hain 3-II)等蛋白的表达情况。2、探讨在人脐静脉内皮细胞中HMGB1与细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路之间的关系。方法:取对数生长期的HUVEC为实验研究对象1、高糖对HUVEC损伤的影响:将培养好的细胞随机分为正常对照组(5.5mmol/L),甘露醇组(25mmol/L),高糖组(30mmol/L)。观察指标:1、细胞学形态;2、NO的分泌量;3、Western Blot检测各组细胞中HMGB1、mTOR、LC3-II、P62蛋白的表达。2、不同浓度西格列汀干预后对高糖诱导下HUVEC的HMGB1的表达及细胞自噬的影响:实验分组为高糖组、高糖+西格列汀低浓度组(0.1μmol/L)、高糖+西格列汀中浓度组(1μmol/L)、高糖+西格列汀高浓度组(10μmol/L)。观察指标:1、细胞学形态;2、NO的分泌量;3、Western Blot检测各组细胞中HMGB1、PI3K、Akt、mTOR、LC3-II、P62蛋白的表达。3、调控HMGB1的表达对细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响:实验分组为高糖组、高糖+西格列汀最佳浓度组(10μmol/L)、高糖+西格列汀最佳浓度(10μmol/L)+HMGB1抑制剂组Glycyrrhizic-acid(100μmol/L)、高糖+西格列汀最佳浓度(10μmol/L)+PI3K抑制剂组LY294002(20μmol/L)。观察指标:1、细胞学形态;2、NO的分泌量;3、Western Blot检测各组细胞中HMGB1、PI3K、Akt、mTOR、LC3-II、P62蛋白的表达。结果:1、正常对照组细胞大小均匀,边界清楚,细胞间连接紧密,呈铺路石样,高糖组细胞皱缩,细胞间隙增宽,边界不清。与正常对照组相比,高糖组NO的分泌量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);HMGB1、LC3-II蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05);mTOR、P62蛋白表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。而甘露醇组和正常对照组细胞形态相似,HMGB1、mTOR、LC3-II、P62蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。2、高糖+低/中/高浓度西格列汀组与高糖组对比,HUVEC形态有所改善,随着西格列汀浓度的增加,NO的分泌量增多,差异具有统计学意义(P<0.05);HMGB1、LC3-II蛋白表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05);PI3K、Akt、mTOR、P62蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05);且高糖+西格列汀高浓度组(10μmol/L)效果最明显。3、高糖+西格列汀最佳浓度(10μmol/L)+HMGB1抑制剂组Glycyrrhizic-acid(100μmol/L)与高糖+西格列汀最佳浓度组(10μmol/L)相比,HUVEC皱缩更加明显,细胞间隙增宽,边界不清;NO的分泌量减少,差异具有统计学意义(P<0.05);HMGB1、LC3-II蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05);PI3K、Akt、mTOR、P62蛋白表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。而高糖+西格列汀最佳浓度+PI3K抑制剂组LY294002(20μmol/L)与高糖+西格列汀最佳浓度组(10μmol/L)相比,HUVEC形态有所改善,HMGB1的表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);NO的分泌量增多,差异具有统计学意义(P<0.05);LC3-II蛋白表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05);PI3K、Akt、mTOR、P62蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05);结论:1、高糖可诱导人脐静脉内皮细胞HMGB1表达下调及抑制自噬。2、西格列汀可能通过上调HMGB1的表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进自噬,从而发挥血管保护作用。