miR-513a-3p通过靶向GSTP1调控肺腺癌细胞的化疗敏感性

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuzhugugulili
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肺癌是目前全世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤。化疗在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗中具有极为重要的作用,铂类药物联合其它化疗药物目前仍是治疗晚期NSCLC的标准方案。但是肺癌对铂类耐药现象常在很大程度上影响化疗疗效。据统计,肿瘤的死亡病人中约90%与其耐药性相关。肺癌顺铂耐药的机制复杂,有很多基因、蛋白等因素参与了该过程。其中GSTP1基因在肺癌顺铂耐药的形成过程中具有重要的意义。在细胞内,该基因受复杂的网络调控,其中微小RNA(microRNA,miRNA)的调节是近些年广泛关注的一个焦点。miRNA是一类在动植物细胞中广泛表达的小分子非编码RNA(ncRNA),通过与靶mRNA3’非编码区(3’-UTR)的相应位点结合而发挥抑制靶基因表达的功能,目前认为人类有数千个基因都受到miRNA的调控,这些基因约占人类全部基因的三分之一。miRNA是人类基因调控网络中的关键成分,因而在细胞分化、组织形成、肿瘤发生及化疗药物耐药等方面有着重要的生物学作用。本研究中,我们以肺腺癌细胞A549、A549/CDDP及SPC-A-1为研究模型,以GSTP1基因为研究对象,探讨可以调控GSTP1基因表达并能增强肺腺癌细胞对顺铂敏感性的miRNA。首先我们验证了GSTP1基因在A549和A549/CDDP细胞中的差异表达, GSTP1mRNA和蛋白在A549/CDDP细胞中明显上调,同文献报道的变化趋势一致,其中mRNA水平为A549细胞的2.7±0.38倍(p<0.05)。而miR-513a-3p在A549/CDDP细胞中明显下调,为A549细胞的0.34±0.03倍(p<0.05),两者表达呈负相关。接着我们利用荧光素酶报告基因技术证实了GSTP1是miR-513a-3p的一个靶基因。进而通过Western Blot验证了在人肺腺癌细胞A549/CDDP和SPC-A-1中过表达miR-513a-3p后,细胞内GSTP1蛋白明显下调。同时我们用CCK-8法检测了在miR-513a-3p和顺铂的共同作用下细胞的凋亡率,发现miR-513a-3p可以分别使人肺腺癌细胞A549/CDDP和SPC-A-1对顺铂的敏感性提高34.5%(p<0.05)和30.8%(p<0.05)。因此,在人肺腺癌细胞中miR-513a-3p可以通过靶向调节GSTP1而增强肺癌细胞对顺铂的敏感性。
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