【摘 要】
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孵化是南方根结线虫的重要生命过程,控制线虫卵的孵化是防治线虫的一种方法。本论文发现了具有刺激卵孵化活性的菌株（Trichoderma sp.3838）,进一步分离鉴定其活性代谢产物,筛选参与孵化的相关基因,并通过RNAi验证其功能,得到以下结果:1、在促孵化活性实验中,该发酵液可以快速高效地促进南方根结线虫卵的孵化。其中,100℃加热后的发酵液的促孵化活性最好,其线虫孵化速率是对照组中孵化速率的3
【基金项目】
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国家自然科学基金项目:根际芽孢杆菌影响南方根结线虫趋化性的化感物质及其作用机制（31860027）
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孵化是南方根结线虫的重要生命过程,控制线虫卵的孵化是防治线虫的一种方法。本论文发现了具有刺激卵孵化活性的菌株（Trichoderma sp.3838）,进一步分离鉴定其活性代谢产物,筛选参与孵化的相关基因,并通过RNAi验证其功能,得到以下结果:1、在促孵化活性实验中,该发酵液可以快速高效地促进南方根结线虫卵的孵化。其中,100℃加热后的发酵液的促孵化活性最好,其线虫孵化速率是对照组中孵化速率的3倍。同时,稀释10×浓度下的发酵液促孵化活性最佳,其孵化速率是对照组中的4倍。2、活性化合物分离、鉴定与活性测试。从乙酸乙酯粗提物中分离得到8个化合物。这8个化合物能在4天内快速高效的促进南方根结线虫卵块的孵化,在HY-1、HY-2、HY-9实验组中,线虫的孵化率达到90%以上,而后进入平台期。而对照水中线虫的孵化速率是稳步增长的,孵化率达到90%至少需要12天。8个化合物促孵化活性顺序为:HY-1>HY-9>HY-2>HY-3>HY-11>HY-8>HY-6>HY-13。3、孵化相关基因的RT-PCR结果显示,在活性化合物HY-1作用下,16个孵化相关基因表达量发生了变化。其中,daf-21、hch-1,eft-2、mapk1、mapk3、let-60相对表达量上调到2倍以上;xyl-1和mep-1相对表达量显著下调。4、通过RNAi实验验证相关基因的功能。基因mapk1和mapk3的dsRNA处理卵块后能使其表达量显著下调,影响南方根结线虫的正常孵化,同时也严重影响了线虫的存活率。与之比较,dsRNA与化合物HY-1共同处理卵块后,mapk1和mapk3的表达量提高了 1-2倍,同时提高了线虫的孵化率,而且新孵化线虫死亡率下降到一半左右。论文创新点:（1）首次报道了菌株Trichoderma sp.3838及其代谢产物能快速高效促进南方根结线虫卵孵化。（2）活性化合物HY-1引起南方根结线虫16个孵化相关基因转录水平变化,并用RNAi验证了mapk1、mapk3在孵化过程中的功能。
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