纤维素酶高产菌株的选育及玉米秸秆糖化发酵乳酸的研究

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本文通过紫外线和化学诱变方法对一株纤维素酶产生菌——绿色木霉T.viride 9211进行了菌株选育,提高了产酶能力,变异株T.viride 8140 CMC酶活达到18.8IU/ml,滤纸酶活达到2.08IU/ml。进一步对其发酵条件进行了研究,确定最佳的培养基组成为:(g/L)微晶纤维素10,麸皮10,蛋白胨0.4,尿素0.4,硫酸铵2.0,氯化钙0.2,硫酸镁0.3,磷酸二氢钾2.0;(mg/L)七水合硫酸亚铁5.0,一水合硫酸锰1.6,七水合硫酸锌1.4,氯化钴2.0;(ml/L)吐温-80 2.0。最适发酵条件为:培养温度28℃,初始pH5.5,摇瓶装量50ml/300ml,转速210r/min,接种量4%~6%。在上述培养条件下,CMC酶活达到25.0IU/ml,滤纸酶活达到2.65IU/ml。采用高温高压、稀酸、稀碱和液氨四种方法对玉米秸秆进行预处理,提高了秸秆纤维对纤维素酶的可及度。研究证明,稀碱预处理是效果较好的预处理方法,并通过正交试验,确定了稀碱预处理的最适条件:1%NaOH浓度、15℃、固液比1:20条件下预处理72h,秸秆纤维素的酶解率达到73.5%,半纤维素损失率为33.1%。从高温发酵甘蓝中筛选了一株乳酸菌,命名为LF24,经鉴定为植物乳杆菌。该菌产酸迅速,对葡萄糖产酸转化率达到90%以上,具有较好的耐渗透压特性,且在50℃能够正常发酵产酸,能够适合同步糖化发酵工艺。利用菌株T.viride8140所产纤维素酶对稀碱预处理后玉米秸秆进行单独糖化试验,确定了糖化条件以及最适的酶用量,在此基础上,利用筛选的乳酸菌,采用同步糖化与乳酸发酵工艺进行了产酸试验,乳酸的终含量达到21.5g/L,纤维素对乳酸的转化率达到41.2%。通过初步优化产酸条件,确定纤维素酶批量添加、增加乳酸菌接种量可以增加乳酸的产量,乳酸终含量达到29.6g/L,纤维素对乳酸的转化率达到56.8%。
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