中药高效成分对猪肺泡巨噬细胞(3D4/2)功能的影响及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)机制的研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:laoshuzhuimao
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目的:猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiration syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种具有较强传染性的常见猪病,病毒的一个典型特点就是极易变异,一旦爆发,就会给养猪业造成巨大的经济损失。目前针对该病主要是采取注射疫苗的方式进行预防,但是,尚没有针对患病个体的有效治疗方法。本试验选择3种天然化合物绿原酸、连翘酯苷A和表告依春,分别提取于具有抗病毒作用的常见中草药金银花、连翘和板蓝根。以3D4/2细胞为体外模型,研究三种中药高效成分是否具有增强猪肺巨噬细胞非特异性免疫的作用,是否能够抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒对细胞的感染作用,是否能够抑制由PRRS病毒引起的细胞凋亡,并初步探讨这些中药主要成分的抗病毒机制。方法:(1)采用免疫细胞化学的方法对所使用的3D4/2细胞进行鉴定。(2)运用细胞病变法(Cytopathic effect, CPE)以及噻唑蓝比色法(3-(4,5-dimethyithiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)来确定中药化合物在3D4/2细胞体外模型上的最大安全浓度(maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)。(3)通过免疫细胞化学方法测定PRRSV对3D4/2细胞的侵染作用,并研究安全浓度下添加中药化合物对病毒侵染3D4/2细胞的抑制作用效果。(4)采用中性红吞噬法研究中药化合物对细胞吞噬作用的作用效果。采用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定中药化合物对巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达量变化影响。(5)采用细胞凋亡检测的方法研究安全浓度下添加中药化合物对PRRSV诱导细胞凋亡所起到的作用效果。结果:中药提取物表告依春、连翘酯苷A和绿原酸均具有体外抗PRRSV的作用。绿原酸的最大安全浓度为:250μg/mL,连翘酯苷A的最大安全浓度为:125μg/mL,表告依春的最大安全浓度为:1000μg/mL。在最大安全浓度下添加绿原酸、连翘酯苷A和表告依春在3D4/2细胞上均表现出抗PRRSV的作用。其中绿原酸和连翘酯苷A能够有效增强3D4/2细胞的吞噬能力,绿原酸、连翘酯苷A和表告依春能够使增强TNF-α和IL-6的分泌,同时抑制IL-10的分泌,并且绿原酸、连翘酯苷A和表告依春能够抑制由PRRSV引起的3D4/2细胞凋亡。结论:中药提取的天然化合物绿原酸、连翘酯苷A和表告依春具有较强的体外抗PRRSV的作用,并且绿原酸、连翘酯苷A和表告依春可以增强3D4/2细胞的非特异性免疫能力,推测绿原酸、连翘酯苷A和表告依春的抗病毒机制可能是增强细胞非特异性免疫,并能通过直接灭活PRRSV和抑制由PRRSV引起的细胞凋亡来实现的。
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