口蹄疫病毒前导蛋白抑制NF-κB介导的Ⅲ型干扰素表达的研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xixihahawotiana
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是家畜口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)的病原,主要侵染牛、羊、猪等偶蹄动物,引起传染性极强的群发疫病。该病的特征症状是口、鼻、蹄和乳房等部位出现水疱,可见FMDV主要侵染宿主的上皮组织。近几年发现的IFN-λ3是III型干扰素(interferon,IFN)的成员之一,主要产生靶向上皮组织的专一抗病毒效果。目前,对FMDV与猪源IFN-λ3的关系了解甚少,因此,猪源IFN-λ3的研究将为更加有效防控FMD提供新的思路。FMDV前导(leader)蛋白(Lpro)是拮抗宿主细胞天然免疫应答的重要蛋白。Lpro能通过多种途径调控IFN的表达,推测也能调控IFN-λ3的产生。为了获得抗Lpro抗体,本研究采用原核表达获得了重组Lpro,利用其制备了高效价的兔抗血清,该血清能够特异性识别FMDV感染过程中产生的Lpro。为了获得猪源IFN-λ3蛋白,将猪源IFN-λ3基因定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,利用大肠杆菌BL21表达了目的蛋白,最终获得了重组猪源IFN-λ3蛋白。用纯化的猪源IFN-λ3蛋白研究其对FMDV复制的影响,发现IFN-λ3以剂量依赖性方式抑制FMDV增殖,用siRNA技术将细胞内IFN-λ3进行基因沉默后,发现FMDV的复制水平升高,这些结果说明猪源IFN-λ3具有抗FMDV复制的作用。本研究也检测了FMDV感染对IFN-λ3表达的影响,结果显示病毒感染减少了poly(I:C)诱导的IFN-λ3生成,表明FMDV能够利用某种机制拮抗IFN-λ3的抗病毒效应。本研究发现FMDV编码的Lpro发挥抑制IFN-λ3表达的作用,且该抑制作用与Lpro的切割功能相关。Jaspar软件预测结果显示猪源IFN-λ3启动子序列上有NF-κB(nuclear factor kappa-B)结合位点。p65/RelA是NF-κB的活性亚基,有调控IFN转录的作用,据此推测p65/RelA很可能参与IFN-λ3的激活。实验结果发现,过表达p65/RelA显著升高IFN-λ3的mRNA的水平,还能抑制FMDV的复制,说明p65/RelA确实参与调控IFN-λ3表达。接下来探究Lpro能否通过作用p65/RelA而调控IFN-λ3的产生,Western blotting试验证明Lpro不仅能降解内源p65/RelA,还能切割外源p65/RelA,而且切割位点突变后不能检测到p65/RelA切割条带。间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescent assay,IFA)结果显示Lpro与p65/RelA在细胞核共定位。以上这些发现表明Lpro能够直接切割p65/RelA,Lpro与p65/RelA的相互作用导致Lpro下调p65/RelA介导的IFN-λ3表达,该下调能力也与Lpro的切割功能有关。综上所述,本研究制备了Lpro兔抗血清和猪源IFN-λ3蛋白,发现FMDV利用自身编码的Lpro切割p65/RelA从而拮抗IFN-λ3抗病毒反应,深化了对FMDV致病机制的认识,为发展新型FMD防控技术提供了理论支持。
其他文献
目的:探讨血清尿酸(uric acid,UA)水平与风湿性心脏瓣膜病患者心房颤动(atrial fibrillation,AF)之间的关系。方法:回顾性分析334例住院的风湿性心脏瓣膜病患者,根据有无AF分
随着海上风电技术逐渐成熟,海上风电项目成为发展绿色能源的重要组成部分。海上风电场的建设和运行维护不可避免会产生相应的环境污染问题。海上风电结构要面对海浪负荷,通常
水稻是我国及世界大部分人口的主要口粮,随着人口的增加,以及工业用量增多,用量和缺口将不断增大,因此,培育高产水稻品种仍是水稻品种遗传改良的主旋律。水稻产量主要由单位
安东尼娅·苏珊·拜厄特是英国著名的小说家,诗人和文学评论家,其作品《占有》吸引了众多中外学者的关注。他们从主题分析,女性主义,原型批评,比较研究等不同角度对小说进行
在电力系统中,电力线路作为供电系统的重要组成设备,参与到电能输送和分配的任务之中。多年的运行经验表明,由于电力线路等设备长期暴露于恶劣的环境之中,容易受到内部状态因
民众的各类抗争行为(Contentious Movements)是我们观察社会状况、社会问题乃至国家政治结构变迁的重要窗口。梳理西方关于抗争行为的理论研究,我们发现其经历了从强调抗争行
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起哺乳仔猪严重腹泻甚至死亡的高度接触性肠道冠状病毒,对当前新生仔猪健康造成了严重的威胁。PEDV主要
石墨烯基复合膜具有优异的力学性能及热稳定性,在许多领域都显示出巨大应用潜力。但目前石墨烯的研究已经到了一个创新的阶段,即迫切需要创新的方法来加工石墨烯纳米复合膜,
微生物燃料电池(MFC)在污水净化的同时产生电能,是一种具有前景的污水资源化利用和能源再生技术。开发高效、低成本的阴极氧还原(ORR)催化剂是当前MFC领域的研究重点和难点。
核物质状态方程(EOS)是核物理研究的基本问题之一。EOS中同位旋标量项已经比较确定,因此同位旋矢量项,即对称能的密度依赖,是当前亟待解决的问题。因为对称能与奇异原子核性质