灰霉菌（Botrytis cinerea）是一种能够侵染世界范围内超过1000种植物的坏死型营养真菌,造成严重的植物病害,给农业生产带来巨大的经济损失。光照作为一种重要的环境信号,影响着真菌的生长发育、次级代谢以及致病性等各个方面。真菌对于不同波长范围的光信号的感知依赖于体内存在的不同的光受体,蓝光受体是真菌中重要的一类光受体,包括WC-1、WC-2和VVD三个组分。前人研究发现灰霉菌中的Bc WCL1能够调控其生长发育和致病性,但是另外两个蓝光受体组分Bc WCL2和Bc VVD1的功能仍有待探究。因此,为了进一步明确灰霉菌中三个蓝光受体组分在调控生长发育和致病性中的具体功能以及三个蓝光受体之间的相互作用关系,我们对灰霉菌中的bcwcl2和bcvvd1进行了研究,结果如下:1、采用同源重组的策略敲除了bcwcl2并进行了回补。为了证明bcwcl2能够参与灰霉菌的光响应,我们检测了?bcwcl2中光响应基因在黑暗和光照下的表达情况,发现光响应基因在野生型中能够被光照特异性地诱导表达,但是在?bcwcl2中却丧失了光诱导的特性,说明bcwcl2参与了灰霉菌的光响应。2、探究了bcwcl2对灰霉菌生长发育的调控,发现与野生型相比,?bcwcl2的生长速率显著降低,光照下分生孢子产量增加,黑暗下丧失了产菌核的能力;进一步对?bcwcl2在4h的孢子萌发率和8h的萌芽管长度统计发现均低于野生型。以上结果说明bcwcl2对灰霉菌的生长、产孢及菌核的产生具有调节作用。3、为了明确bcwcl2对灰霉菌致病性的调控作用,我们选取番茄叶片和苹果果实作为寄主植物进行了接种实验,结果表明在持续光照（LL）、光暗交替（LD）和持续黑暗下（DD）?bcwcl2的致病性均显著低于野生型,表明bcwcl2对灰霉菌致病性的调控作用并不依赖于光照。进一步分析?bcwcl2对活性氧积累、多聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶、蛋白酶和生物有机酸分泌的影响,发现?bcwcl2分泌多聚半乳糖醛酸酶和有机酸的能力显著降低,叶片接种点活性氧的积累减少。在?bcwcl2接种点位置维持低p H环境,?bcwcl2的致病性得到恢复。同时?bcwcl2中毒素合成相关基因的表达量显著下降。以上结果表明bcwcl2能够通过影响活性氧的积累以及多聚半乳糖醛酸酶、有机酸、毒素的合成与分泌来正调控灰霉菌的致病性。4、为了探究bcvvd1基因的功能,应用同源重组的策略敲除了bcvvd1并进行了回补。结果表明?bcvvd1在光下丧失产生分生孢子的能力,而在暗下依然能够产生菌核,?bcvvd1的生长速率与致病性同野生型相比均无显著差异,表明bcvvd1能够促进灰霉菌分生孢子的产生,但并不影响灰霉菌的生长、菌核的产生和致病性。5、为了进一步明确bcvvd1的功能,我们对bcvvd1是否参与到灰霉菌的光适应过程进行了探究。将野生型和?bcvvd1菌株分别光照处理0h、0.5h、1h、2h、5h后收集菌丝并提取RNA,检测WCC下游光响应基因表达量的变化,发现无论是在野生型还是?bcvvd1中,在0-1h短时光照下光响应基因均被显著诱导表达,而2-5h后表达量均呈下降水平。说明?bcvvd1与野生型均存在光适应的现象,即bcvvd1不参与灰霉菌的光适应性。6、为了揭示三个蓝光受体之间的相互作用关系,我们对Bc WCL1、Bc WCL2和Bc VVD1之间的互作关系进行了探究。前人已经证明Bc WCL1和Bc WCL2之间能够相互作用,但是对于其它蛋白之间的互作关系并不明确。我们通过酵母双杂实验发现Bc VVD1能够分别与Bc WCL1和Bc WCL2相互作用,并通过分别敲除Bc WCL2中的PAS结构域和Zn F结构域,发现Bc WCL2?Zn F与Bc VVD1之间的互作关系减弱,说明Bc WCL2中的Zn F结构域参与Bc WCL2与Bc VVD1的互作。7、为了证明Bc WCL2能够作为转录因子转录调控灰霉菌的致病性,首先对Bc WCL2进行了亚细胞定位分析,发现Bc WCL2定位于细胞质和细胞核中,其次对Bc WCL2的Zn F结构域进行了敲除并研究了bcwcl2?Zn F的致病性,结果表明bcwcl2?Zn F的致病性显著低于野生型。以上结果初步证明Bc WCL2能够作为转录因子转录调控灰霉菌的致病性。综上所述,本文从生长发育和致病性等多个方面对bcwcl2、bcvvd1的功能进行了详细的验证,明确了它们各自的基因功能。同时对灰霉菌的三个蓝光受体Bc WCL1、Bc WCL2和Bc VVD1之间的互作关系进行了探究,阐明了它们之间的互作模式。本文的研究增强了对灰霉菌光受体功能的认识,为今后全面分析灰霉菌的光信号通路奠定了理论基础。