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我国每年需进口大量草坪草和牧草种子,而草种携带的部分病原真菌对种子发芽、种苗活力具有一定负作用,严重影响农业发展。因此,对其进行快速检测鉴定以及系统研究极其重要。本研究比较了3种基因组DNA提取方法,进一步利用高通量测序技术分析了来源于不同国家的4份多年生黑麦草(Lolium perenne)和5份白三叶(Trifolium repens)种子携带真菌的多样性,并将其与传统分离鉴定结果进行了比较;同时基于DNA条形码技术对重要植物病原真菌镰刀菌(Fusarium spp.)进行快速检测鉴定研究。主要研究结果如下:1.采用CTAB法、尿素法和试剂盒法3种方法提取基因组DNA,比较分析各方法的提取效率。结果表明,尿素法提取的基因组OD260/280值接近于1.80,蛋白质抽提效果较好,含杂质较少,浓度最高达到886.5 ng·μL-1,电泳检测结果条带明亮单一、无拖尾现象,完成过程步骤少、耗时短,优于其他2种方法。2.利用高通量测序技术分析了来源于不同国家的4份多年生黑麦草(L.perenne)和5份白三叶(T.repens)种子携带真菌的多样性。结果表明,不同来源种子携带真菌差异较大,主要携带真菌类群为子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota),占真菌群落的98.3%以上;其中丹麦多年生黑麦草(DH)、美国多年生黑麦草(MH)、加拿大多年生黑麦草(JH)、新西兰多年生黑麦草(XH)分别鉴定了69、40、75、41个属,主要为Davidiella、麦角菌属(Claviceps)和隐球菌属(Cryptococcus)等;澳大利亚白三叶(AB)、丹麦白三叶(DB)、美国白三叶(MB)、阿根廷白三叶(TB)、新西兰白三叶(XB)分别鉴定了52、47、44、65、50个属,主要为Davidiella和链格孢属(Alternaria)等。3.利用传统的形态学观察结合分子标记对进境草种携带真菌进行分离鉴定,结果表明,9份样品共检测出9属19种89个菌株,只分离到了少量的优势菌群,AB主要携带Stemphylium vesicarium(57.2%),DB、XB和MH主要携带A.infectoria(100%,100%,94.7%),MB主要携带Cladosporium tenuissimum(71.4%),TB和JH主要携带A.alternata(45.5%,66.7%),DH主要携带Aspergillus fumigatus(66.7%),XH主要携带Epicoccum nigrum(100%)。传统分离鉴定结果中AB、TB和JH携带真菌种类较多,与高通量测序多样性指数计算结果一致。4.选取ITS(内转录间隔区)、EF-1α(翻译延伸因子)、mt SSU(核糖体小亚基)和β-tubulin(β-微管蛋白)四个候选基因对镰刀菌属11个种进行扩增,筛选适合于镰刀菌属鉴定的DNA条形码。结果表明,EF-1α基因扩增与测序成功率高于mt SSU和β-tubulin,为98.2%,种内与种间遗传距离重叠部分较少,系统发育树中相同种聚集在同一分支,不同种划分在不同分支,鉴别能力较好。因此,EF-1α基因较其他候选基因,更适宜作为镰刀菌属DNA条形码。