杏品种的RAPD分析

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:daren19112879
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利用RAPD技术对新世纪与红丰等杏优新品种进行分析与研究,对新品种推广和进一步育种具有重要意义。本试验以20个杏品种为试材,建立并优化了杏DNA提取及RAPD扩增反应体系,建立了新世纪,红丰等20个杏DNA指纹图谱,找到了参试品种的特异谱带,探讨了它们之间的亲缘关系,主要结果如下:1.建立并优化了杏DNA提取及RAPD扩增反应体系①简化后的CTAB法是提取适刚于杏RAPD扩增的快速,高效的方法。春季刚刚展开的嫩叶片为DNA提取的最佳材料,SDS法提取的DNA量大,但是含有杂质较多,易导致扩增失败。杏叶片DNA提取过程中极易被氧化,及时补加β—巯基乙醇,防止氧化变褐。②研究并确立了适于杏RAPD扩增的程序程序:94℃,2分钟;94℃,30秒;36℃,40秒;72℃,1分钟;45个循环;72℃,5分钟。优化了反应条件;Taq酶需要量为1.5U,Mg2+浓度在1.5-2.5mM,扩增结果稳定。2.从S系列100个引物中筛选出能稳定扩增的18个引物,用这些引物对20个杏品种进行扩增,均具有多态性。共扩增出215条带,108条具有多态性,多态性比例为50.2%。3.首次建立了红丰及新世纪等优新品种的DNA指纹图谱,找到了它们的特异谱带。利用不同的引物组合,根据DNA指纹和特异谱带,可将20个参试品种鉴别出来。4.利用STATISTIC软件,根据RAPD标记相似系数采用UPGAM聚类策略,对20个杏品种进行了聚类分析。在LD=0.4时划等值线,可将参试品种分为以下7类:Ⅰ:红丰,新世纪,红荷包,二花槽,Ⅳ:意人利一号;优系1,株系A,株系B,株系C; Ⅴ:凯特Ⅱ:巴旦水杏 Ⅵ:玛瑙。麦黄杏,串枝红,杨继元杏,李光杏;Ⅲ:德州果杏,玉杏,骆驼黄; Ⅶ:作石杏从以上的聚类结果可以看出:①红丰,新世纪,优系1,株系A,株系B,株系C及双亲红荷包与二花槽,亲缘关系很近,遗传基础相差不大。证实了它们之间存在着亲子关系。②欧洲品种群的意大利一号与凯特等品种间具有很大的遗传差异,分别聚为一类;③麦黄杏,串枝红,杨继元杏及李光杏为古老品种,基因较为保守,聚为一类。
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