茶叶中EGCG和茶黄素的分离纯化

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表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和茶黄素都是茶叶中的天然产物,都具有抗氧化、防治心血管疾病、降血脂、抗癌防癌等保健和药理功能,高纯度产品具有巨大的经济价值,应用的领域越来越多。探索分离纯化高纯度EGCG和茶黄素的工艺具有重要的意义。本文以粒径为15μφ的聚苯乙烯-二乙烯基苯微球(PS-DVB)为填料,装入规格为4.6×250 mm的色谱柱中,先在高效液相色谱上对其分离EGCG进行研究,初步确定了流动相为安全性较高的乙醇水溶液并确定了乙醇与水的比例。然后又把PS-DVB填料装入规格为36.6-207 mm的Flash色谱柱中,在中压制备液相色谱上,以产品纯度、产率和回收率为主要指标,对流动相比例、流动相流速和上样量进行工艺优化,最后得到最佳的工艺条件:流速为10 mL/min、流动相为乙醇/水=30/70(v/v)、上样量为900 mg。在该条件下对EGCG粗品(71.7%)进行分离纯化,最后得到的EGCG纯度为97.02%,回收率为75.81%。该工艺方法具有处理量大、产品安全性高、操作简单和生产周期短等特点,为高纯度EGCG的大规模生产提供了有效的技术支持。通过静态吸附实验筛选出对纯化茶黄素效果最佳的树脂HZ-816,然后通过动态洗脱实验确定了穿透体积、洗脱液类型及其浓度,又考察了上样浓度、上样流速和洗脱体积对分离茶黄素的影响,同时探讨了树脂的再生及其稳定性。最后使用全自动制备色谱仪在最佳的条件下纯化茶黄素粗品,最佳工艺条件是:把3BV 40 mg/mL的茶黄素粗品以2 BV/h流速上样,用1 BV的去离子水将料液洗出,2 BV 30%的乙醇水溶液除去杂质,4 BV 60%的乙醇水溶液洗脱茶黄素产品并用自动收集器收集流出液,再用5 BV的乙醇盐酸溶液进行树脂再生。最后经过蒸馏、真空冷冻干燥得到黄色粉末即为茶黄素,在HPLC上检测其纯度为90.8%,回收率为56%。该方法操作简单、可连续生产,为茶黄素的大规模生产提供了一条可行的思路。
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