不动杆菌11-02产铁载体发酵上清液促纳米银形成机理的研究

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不动杆菌11-02(Acinetobacter sp.11-02)产铁载体发酵上清液与AgNO3溶液混合可以制备纳米银颗粒,发现发酵上清液中铁载体起到了关键作用。文章首先对不动杆菌11-02发酵上清液与AgNO3溶液混合制备纳米银的条件进行了优化,并探究了不同Fe3+浓度培养条件下发酵上清液中铁载体含量与制备的纳米银产量之间的关系。本文通过单因素试验结合响应面分析方法对不动杆菌11-02发酵上清液产铁载体的条件进行了优化,并分别采用萃取-TLC(GF254薄层层析板)纯化和离子交换树脂纯化两种方法对发酵上清液中的铁载体进行了分离纯化。最后,本文从光照条件着手对铁载体促纳米银形成的机理进行了研究。实验内容如下:1.制备纳米银条件的优化。对不动杆菌11-02发酵上清液与AgNO3溶液混合制备纳米银的条件进行优化,当发酵上清液与1 mM的AgNO3溶液在混合比例为1:2、pH为9.0、30℃、反应24 h时得到的纳米银产量最高,达到了OD450nm=1.9,优化后纳米银的产量提高了12%。2.铁载体对纳米银合成影响的探究。随着不动杆菌11-02发酵培养基中Fe3+浓度的增加,发酵上清液中铁载体的浓度与制备的纳米银的产量均同步下降,两者的拟合系数R2=0.992,推测铁载体在制备纳米银的过程中起到了重要作用。3.产铁载体条件的优化。经过单因素和响应面分析优化后的不动杆菌11-02的营养成分为NaNO3 0.4 g、K2HPO4 0.65 g、C6H5Na3O7·2H2O 3.5 g、NH4NO3 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.1 g、CaCl2 0.05 g,培养条件为培养时间和培养温度分别为40 h和25℃,摇床转速180 r/min、接种量5%和pH 7.0,优化后发酵上清液中铁载体的含量达到88.7μM,优化前发酵上清液中铁载体的含量为28.1μM,优化后发酵上清液中铁载体含量提高了3.2倍,优化效果相当明显。4.分别利用两种方法分离纯化酚型铁载体。采用萃取-TLC纯化法和离子交换树脂纯化法对铁载体进行纯化,萃取-TLC纯化法包括乙酸乙酯的初步萃取和TLC板的纯化两部分,离子交换树脂纯化法是利用离子交换树脂对不动杆菌11-02发酵上清液中的铁载体进行吸附和梯度洗脱相结合的方法,两种方法均操作简单,且可获得较纯的铁载体。5.铁载体促纳米银形成的机理探究。光照在铁载体促纳米银形成的机理中具有重要作用。在自然光下,纳米银的产量随光照强度的增加而增加。光源波长在制备纳米银的过程中有较大的影响,在实验条件下,随着光源波长的增大,纳米银的产量呈现增加后缓慢下降的趋势,在光源波长为蓝色(450-480 nm)条件下混合溶液制备纳米银产量最大。只有在不动杆菌11-02发酵上清液、硝酸银溶液和光照三者同时存在的情况下才可以制备出纳米银,三者缺一不可。探究发现制备纳米银反应有一个红限波长且反应是瞬时的,相同光源波长条件下光照强度对实验结果并无明显影响,推测纳米银形成过程主要依赖光电效应下发生的电子转移。
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