鲤春病毒血症(Spring Viraemia of Carp, SVC)是一种鲤科鱼类的急性、出血性的传染病，可引发多种鲤科鱼类感染，造成巨大的经济损失。鲤春病毒血症病毒（SVCV）囊膜上具有G蛋白，是病毒最主要的抗原表位，同时也与病毒内吞密切相关。单克隆抗体（MonoclonalAntibody，mAb）是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，具有特异性强、灵敏度高，能够大量制备的特点，在病毒的检测方面具有广阔的应用前景，OIE推荐的SVCV检测方法是建立在单克隆抗体基础。本文重组表达鲤春病毒G蛋白片段，并制备其特异性单克隆抗体。与全病毒抗原相比，以G蛋白为抗原制备的单克隆抗体有显著地优势，可简化准备流程、提高阳性率、缩短制备周期。目前尚无以重组SVCV-G蛋白制备单克隆抗体的先例。主要结果和结论如下：1、G蛋白的表达与纯化。本章扩增了SVCV G基因片段(63-1389bp)，构建pET-28a-G重组表达质粒，实现了G蛋白在大肠杆菌中高效表达，表达产物以包涵体形式存在。这与张琳等的结果相符。通过变性、洗涤纯化，获得较纯的变性蛋白，经过透析复性后，达到免疫用蛋白抗原的要求。杨振慧等割胶回收包涵体，免疫新西兰大白兔，成功制备出抗SVCV的多抗，表明G蛋白存在线性表位，这是本文以变性后的G蛋白制备单克隆抗体的依据。2、抗SVCV-G蛋白单克隆抗体的制备。本文以复性蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠，本文取免疫5次后的小鼠脾细胞与处于对数生长期的SP2/0融合，收获300余株融合细胞，融合率约为50%。采取间接ELISA结合间接IFA的方法筛选出抗G蛋白的单抗，前者适合大批量筛选，缩小检测范围，后者验证单抗是否与天然病毒特异性反应。最终筛选出2株稳定分泌抗G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1C5，2D5。3、对两株单抗1C5、2D5进行特性分析。两株单抗均属于IgG亚型。其培养上清的效价达到1:2560和1:5120，效价较高；Western Blot在约51.6kD处有特异性的反应条带，表明两株单抗均可特异性地识别G蛋白；稳定性分析结果表明经多次传代后可稳定分泌抗体。本研究通过原核表达技术重组表达鲤春病毒G蛋白，包涵体复性后免疫Balb/c小鼠，并采用细胞融合法获得阳性杂交瘤细胞株，经筛选后成功获得抗鲤春病毒G蛋白的单克隆抗体，为建立新型SVCV检测方法奠定基础。