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目的:探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16亚型阳性宫颈癌患者宫颈上皮脱落细胞中蛋白质的表达变化,以HPV阴性宫颈正常组为对照,筛选出HPV16阳性宫颈癌中差异表达的蛋白,推测宫颈癌的发生发展与蛋白表达水平失调的关系;分析这些差异表达蛋白的主要功能、涉及的主要信号通路以及差异蛋白之间的相互作用,初步探索与HPV16阳性宫颈癌发生发展的关键蛋白及其分子机制。方法:1)临床样本的收集:收集2017年12月至2018年7月间于贵州医科大学附属医院及贵州医科大学附属肿瘤医院行HPV基因分型检测,报告为单一HPV16亚型阳性或HPV阴性的宫颈脱落细胞样本,保存于-80°C冰箱,并跟踪其病理诊断结果确诊为宫颈正常或宫颈癌的患者。2)分组:分为HPV阴性宫颈正常组(A组)及HPV16阳性宫颈癌组(B组),并每个组进行三次生物学重复,分别为:A1、A2、A3;B1、B2、B3;共6个组,每个重复组15例混合,共90例。3)利用基于串联质谱标签(Tandem Mass Tag,TMT)联合液相色-谱串联质谱(Liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)的定量蛋白组学技术对上述6个组的宫颈脱落细胞中的蛋白进行精确的鉴定及定量,筛选出HPV16阳性宫颈癌相对于HPV阴性宫颈正常组差异表达的蛋白质,再结合生物信息学分析手段分析这些差异蛋白的主要功能、涉及的主要信号通路以及差异蛋白之间的相互作用。4)为验证高通量蛋白质组学数据的可靠性,选择部分差异蛋白进行Western Blot检测。5)应用STRING技术平台初步分析候选蛋白与PI3K-Akt增殖和凋亡相关蛋白之间的相关性。结果:1)HPV16阳性宫颈癌组与HPV阴性宫颈正常组比较,共鉴定到351个差异表达蛋白,包括247个上调蛋白和104个下调蛋白,这些差异表达蛋白主要参与“Single-multicellular organism process”、“multicellular organismal process”及“negative regulation of biological process”等生物学过程;“extracellular membrane-bounded organelle”、及“extracellular exosome”等细胞成分;“protein binding”、“structural molecule activity”以及“enzyme binding”等分子功能。这些差异表达蛋白主要参与“PI3K-Akt”、“ECM-receptor interaction”、“complement and coagulation cascades”等信号通路。2)Western Blot检测结果证实,与HPV阴性宫颈正常组比较,PRDX2、GRP94及G6PD蛋白表达水平在HPV16阳性宫颈癌的宫颈脱落细胞中显著上调,而CSTA及Involucrin蛋白显著下调(P<0.05),与高通量TMT-LC-MS/MS蛋白组学的研究相一致。3)PRDX2、GRP94及G6PD与PI3K-Akt信号通路中Akt、P53蛋白之间存在相关联,且GRP94与Akt的相关性较其两种蛋白更强。结论:1)HPV16阳性宫颈癌与HPV阴性宫颈正常者比较存在多种差异表达蛋白;2)这些差异蛋白表达水平的上调或者下调可能与HPV16阳性宫颈癌的发生发展过程有关;3)生物信息学分析技术初步了解这些差异蛋白的生物学功能、涉及的信号通路,尤其GRP94与PI3K-Akt通路的相关性较强,为下一步HPV16阳性宫颈癌发生机制的研究明确了方向。