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姬松茸,原产于巴西原始森林,1988年以来这种菌类植物已在日本和印度尼西亚广泛人工栽培。1995年中国科学院植物所梁净教授采用来自巴西原始森林的野生菌种在福建栽培成功,命名为国产姬松茸(也称为梁金菇)。姬松茸的主要成分如类固醇、多糖、糖蛋白复合物以及核酸等已被分离和纯化。其中发现姬松茸多糖具有抗肿瘤、提高机体免疫力及抗突变、杀菌作用等作用。2000年在我国第二大富硒区陕西省紫阳县秦巴山一带栽培成功,故命名为富硒姬松茸。已有的研究表明巴西姬松茸的药理学效应会受到不同生长条件的影响。而此富含硒的姬松茸抗肿瘤效应国内外尚未相关研究报道。本研究从栽培于我国的富硒姬松茸中分离纯化出硒蛋白多糖。应用Lowry酚试剂法、苯酚-硫酸法、2,3-二氨基萘荧光分光比色法测定硒蛋白多糖中蛋白质、多糖及硒含量,以半数致死量(LD50)评价其毒性水平。绝大多数应用血清药理学法的研究中,使用的药物处理血清主要来自于正常动物血清,部分来自于病理动物模型(如荷瘤)血清,尽管众多文献报道二者均具有良好的实验结果,然而两者之间的差异仍然未见相关研究报道。因此,本文通过体内、体外实验研究了硒蛋白多糖抗肿瘤效果并对比研究了硒蛋白多糖处理荷瘤与非荷瘤小鼠血清体外抗肿瘤效果的差异。具体内容如下:1.体内实验通过建立荷瘤小鼠模型,观察富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖的体内抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。2.体外实验应用血清药理学方法,用硒蛋白多糖处理荷瘤与非荷瘤小鼠后分离出血清,用MTT法观察硒蛋白多糖处理血清对K562细胞增殖的影响;形态学、DNA电泳技术观察凋亡发生;比色法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的活性。研究结果显示:1.硒蛋白多糖中,蛋白质、多糖及硒含量分别为16.32%、81.20%、7.01mg/g。其半数致死量(LD50)>3.0g/kg,属于低毒性物质。2.体内实验结果表明,硒蛋白多糖50.0、100.0mg/kg可以显著抑制BALb/c小鼠移植性肉瘤S180的生长,其抑瘤率分别为22.00%、和37.69%。并具有明显促进荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性和淋巴细胞增殖的作用。提示硒蛋白多糖的抗肿瘤效应与其增强机体免疫力密切相关。3.体外实验结果表明,硒蛋白多糖处理血清可明显抑制体外K562细胞的增殖、诱导K562细胞产生典型的凋亡形态学变化,诸如核片段和凋亡小体的形成。DNA电泳中梯形带形成,这一经典的生化指标进一步证实了凋亡诱导作用。4.硒蛋白多糖处理血清可增强K562细胞内凋亡相关基因Caspase-3的活性,提示硒蛋白多糖处理的荷瘤小鼠血清促凋亡效应可能与上调Caspase-3基因表达有关。5.荷瘤小鼠与非荷瘤小鼠之间的硒蛋白多糖处理血清抗肿瘤作用有显著性差异(P<0.01),这一研究结果说明:要使实验结果能准确代表体内的真实环境,实验者在应用血清药理学实验方法进行实验时,应重视病理动物模型的建立。总之,本文通过体内、体外实验对栽培于我国富硒姬松茸的抗肿瘤效果及机制的研究,揭示了富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖可通过增强机体免疫力抑制体内肿瘤的生长,其处理的血清可通过上调Caspase-3的活性而诱导体外肿瘤细胞的凋亡。这些结果不仅对评价富硒姬松茸抗肿瘤的药用价值提供了有力的理论依据,也为中药血清学抗肿瘤的实验方法提供了可借鉴的经验。