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第一部分:血浆microRNA与ARDS患者病情严重程度及预后相关性的研究目的:本实验研究血浆中MSC-VEC-miRNA(与间充质干细胞及血管内皮细胞相关且既往在ARDS中有过研究的miRNA)水平与ARDS患者病情严重程度的相关性及其对患者预后的预测价值。方法:1、MSC-VEC-miRNA筛选:利用Pubmed数据库通过关键词及主题词检索相关文献,阅读文献筛选出MSC-VEC-miRNA。2、患者入组,标本采集:纳入2016年01月至2016年09月收住东南大学附属中大医院重症医学科诊断为ARDS且符合研究纳入和排除标准的患者,于患者诊断ARDS24小时内采外周血,离心后留取血浆保存。3、患者资料收集:基本资料(年龄、身高、体重等);一般情况(诊断、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、ARDS病因等);氧疗方式及参数(无创呼吸机、有创呼吸机及参数);预后指标(28天病死率等)。4、血浆miRNA检测:荧光定量PCR检测血浆中MSC-VEC-miRNA的循环阈值(CT值)。5、血浆内皮损伤标志蛋白及炎症因子检测:采用ELISA法检测患者血浆中VCAM-1、vWF、TNF-α、IL-10 浓度。结果:1、筛选 MSC-VEC-miRNA,符合条件的 MSC-VEC-miRNA 有14种:miR-15a,miR-16,miR-21,miR-24,miR-26a,miR-27a,miR-27b,miR-126,miR-146a,miR-150,miR-155,miR-221,miR-223,miR-320。2、存活组与死亡组患者一般情况比较:57例患者纳入研究分析,存活组39例,死亡组18例,28天病死率为31.6%。存活组与死亡组间比较:年龄、BMI、基础疾病、ARDS病因、呼气末正压(PEEP)、P02/Fi02无统计学差异(P>0.05)。死亡组患者APACHE Ⅱ评分(26.9±8.5)、SOFA评分(13.7±3.9)和血乳酸(3.1[1.2-5.2])显著高于存活组(18.7±7.1,P<0.001)、(8.9±4.5,P<0.001)、(1.7[0.9-2.4],P=0.01)。而死亡组患者Murray评分显著高于存活组(2.8[2.3-3.7]vs.2.3[1.7-2.7],P=0.01)。3、存活组与死亡组患者血浆MSC-VEC-miRNA、血管内皮损伤蛋白及炎症因子比较:ARDS死亡组患者血浆miR-26a水平明显低于存活组(0.33[0.09-1.17]vs.0.97[0.17-3.49],P=0.046),而 ARDS 死亡组患者血浆 miR-320水平明显高于存活组(0.37[0.16-1.66]vs.0.18[0.07-0.39],P=0.041),其他 12 种miRNA在存活组与死亡组血浆中水平无统计学差异(P>0.05)。存活组与死亡组血浆 vWF、VCAM-1、TNF-α、IL-10 浓度无统计学差异(P>0.05)。4、不同ARDS严重程度患者血浆MSC-VEC-miRNA、血管内皮损伤蛋白及炎症因子比较:纳入患者中,ARDS轻度13例,中度25例,重度19例,轻、中、重度ARDS三组患者血浆MSC-VEC-miRNA水平无统计学差异(P>0.05);三组患者血浆vWF、VCAM-1、TNF-α、IL-10水平无统计学差异(P>0.05)。5、血浆MSC-miRNA对ARDS28天预后的预测价值:(1)miR-26a:AUC=0.67,p<0.05;(2)miR-320:AUC=0.67,p<0.05;(3)联合 miR-26a、miR-320:AUC=0.75,p<0.001。结论:血浆MSC-VEC-miRNA水平与ARDS严重程度无相关性,血浆miR-26a、miR-320对ARDS患者28天预后有一定的预测价值。第二部分:肺内源性ARDS和肺外源性ARDS患者血浆microRNA表达水平差异的研究目的:本实验探究MSC-VEC-miRNA(与间充质干细胞及血管内皮细胞相关且既往在ARDS中有过研究的miRNA)在肺内源性ARDS和肺外源性ARDS患者血浆中水平差异。方法:1、MSC-VEC-miRNA筛选:利用Pubmed数据库通过关键词及主题词检索相关文献,通过阅读文献筛选出MSC-VEC-miRNA。2、患者入组,标本采集:纳入2016年01月至2016年09月收住东南大学附属中大医院重症医学科诊断为ARDS患者并符合本研究纳入和排除标准的患者57例,于患者诊断ARDS 24小时内采外周血,离心后留取血浆并保存。3、患者资料收集:基本资料(年龄、身高、体重等);一般情况(诊断、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、ARDS病因等);氧疗方式及参数(无创呼吸机、有创呼吸机及参数);预后指标(28天病死率等)。4、血浆miRNA检测:荧光定量PCR检测出血浆中MSC-VEC-miRNA的循环阈值(CT值)。5、血浆内皮损伤标志蛋白及炎症因子检测:采用ELISA法检测患者血浆中VCAM-1、vWF、TNF-α、IL-10浓度。结果:1、筛选 MSC-VEC-miRNA,符合条件 MSC-VEC-miRNA有14种:miR-15a,miR-16,miR-21,miR-24,miR-26a,miR-27a,miR-27b,miR-126,miR-146a,miR-150,miR-155,miR-221,miR-223,miR-320。2、肺内与肺外源性ARDS患者临床病情指标比较:符合标准的57例ARDS患者纳入研究分析,其中肺内源性ARDS 43例,肺外源性ARDS 14例。肺内源性ARDS患者与肺外源性ARDS患者一般情况比较:两组间年龄、性别、BMI、基础疾病、28天病死率、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、乳酸无统计学差异(P>0.05)。肺内源性ARDS患者与肺外源性ARDS患者ARDS严重程度比较:PO2/FiO2在肺内源性ARDS组明显低于肺外源性ARDS组(145[119-203]vs.206[184-253],P=0.012);Murray肺损伤评分在肺内源性ARDS组显著高于肺外源性 ARDS 组(2.7[2-3.3]vs.1.8[1.3-2.4],P=0.008),两组间 FiO2、PEEP无统计学差异(P>0.05)。3、肺内与肺外源性ARDS患者血浆MSC-VEC-miRNA比较:肺外源性ARDS 患者血浆肺外源性 ARDS 患者血浆 miR-221(0.22[0.12-0.49])、miR-27b(0.34[0.10-0.46])水平显著低于肺内源性 ARDS 患者(0.57[0.22-1.57],P=0.008)、(0.60[0.20-1.46],P=0.025),其他miRNA在两组患者血浆中表达水平无明显差异(P>0.05)。4、肺内与肺外源性ARDS患者血管内皮损伤蛋白及炎症因子比较:肺外源性ARDS组患者血浆vWF显著低于肺内源性ARDS患者(0.77[0.29-1.54]vs.1.80[0.95-3.51],P=0.048);VCAM-1、IL-10、TNF-α 在两组患者血浆中的浓度无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-221、miR-27b、vWF在肺外源性ARDS患者血浆水平显著低于肺内源性ARDS患者。