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蓖麻毒素(RicinToxinRT)存在于大戟科植物蓖麻籽中,主要是蓖麻碱、蓖麻毒蛋白(Ricin)及过敏性物质,Ricin是强细胞毒蛋白,对肿瘤细胞半数杀伤的浓度--IC60在10-12molL左右。Ridcin分子由A,B二条肽链构成,通过一对二硫键相连。A链(RicinToxinAChain,RTA)是活性链具有毒性,能使核糖体失活,抑制蛋白质的合成,使细胞死亡。但是单一的RTA无法进入细胞,无毒或毒性有限;B链(RicinToxinBChaimRTB)对细胞没有毒性,其功能是帮助RTA进入细胞。胁cin应用于临床肿瘤治疗的研究和应用由来已久。
为了避免Ricin的高毒性,发挥它在肿瘤治疗中的作用,设想将RTA和RTB分开,将蓖麻毒蛋白B链基因插入El基因缺失腺病毒中,利用病毒作为载体在肿瘤灶局部表达RTB蛋白,然后再注射入RTA,由于RTA与RTB具有很强的亲和性(0lsnesetaL.2001),RTA将向肿瘤灶局部富集,并在RTB的帮助下进入细胞,发挥RTA的细胞毒作用,杀伤细胞。同时,杀伤的细胞会释放RTA/RTB复合体,产生一定的旁观者效应,杀伤周围细胞。
为了验证这一设想的可行性,本研究用原核表达系统融合表达带有His和Trx标签的RTA,分离制备了有生物活性的可溶性RTA蛋白,并且构建了表达RTB的重组腺病毒载体,能在目的细胞中表达RTB蛋白。用表达RTB的重组病毒感染HEK293、№la、Smmc7721、HL7702等细胞,然后加入纯化的RTA蛋白,发现细胞生长受到明显的抑制,大量细胞死亡。不表达RTB的对照腺病毒比较感染细胞后加入RTA蛋白,细胞则基本没有受到影响。同时处理细胞的上清液对正常细胞有明显的杀伤作用,提示产生了RTA/RTB复合体,具有一定的旁观者效应。
这些结果在细胞培养系统中初步证实上述设想的可行性,为进一步的动物实验,和在此基础上构建特异性表达RTB的载体系统提供了基础,为人类肿瘤基因治疗做了一些有意义的探索。