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[目的]变形链球菌(Streptococcus mutans, MS)是一种在口腔中与龋病相关的最常见的细菌,乳酸杆菌(lactobacilli bacteria, LB)和双歧杆菌是最常见的益生菌,同时也被认为是龋病的致病菌之一。目前关于它们对变形链球菌作用的研究较少,其抑制变形链球菌的机制还未明确。本研究的目的在于通过菌落计数观察不同种类LB及其上清液对MS生长的作用,并通过荧光显微镜观察LB上清液对MS生物膜的抑制作用,同时研究益生菌对高龋儿童口内MS临床分离株的生长的影响,初步研究LB抑制MS的作用及其作用机制,探讨其预防龋病的临床应用价值。[材料和方法]1.LB及其上清液对MS的抑菌作用：实验组选取五种LB菌株(L. casei Shirota, L. casei LC01, L. plantarum ST-Ⅲ, L. paracasei Lpc-37, L. rhamnosus HN001)1×106CFU/ml,1×108CFU/ml,3×108CFU/ml三个浓度各0.25ml,加浓度为1.5×108CFU/ml MS菌液0.25ml和1.5ml BHI液体培养基,对照组LB菌液以金黄色葡萄球菌ATCC25923菌液代替。LB上清液对MS的抑制实验中,未经过和经过pH调节和超滤处理的五种LB上清液代替上述步骤中的LB菌液,对照组LB上清液以MRS肉汤代替,分别37℃6%CO2培养箱培养24小时,梯度稀释,计数MS菌落。2.LB对MS生长及生物膜形成的抑制作用：实验组取1.5×108CFU/ml浓度的MS悬液0.1ml,加入内置盖玻片的无菌培养皿中,分别加入9.5ml BHI液体培养基,0.4ml上述五种LB上清溶液,对照组LB上清液由0.4ml生理盐水代替,6%C02培养箱培养24小时获取和固定生物膜,用0.01%的吖啶橙AO进行染色,荧光显微镜下观察。3.SDS-PAGELB上清液经过超滤后冷冻干燥,溶于100ul超纯水,置于15%的Tris-HCL预制胶电泳90分钟,考马斯亮蓝R250染色摄片观察。4.对MS临床分离株的抑菌作用按照ICDAS标准,选取高龋儿童20例作为实验组,用MSB选择性培养基从唾液中分离MS,按方法1测定五种LB对MS分离菌株生长抑制情况。同时按方法2制备混合菌斑生物膜并观察LB对生物膜内链球菌的影响。[结果]1.LB及其上清液对MS抑菌作用：五种LB在1×108CFU/ml,3×108CFU/ml浓度下可抑制MS的生长(P<0.05),未经过pH调节和超滤处理的五种LB上清液及经过pH调节和超滤处理处理后的上清液L. casei Shirota和L. rhamnosus HN001对MS生长仍有抑制效果(P<0.05)2.LB上清液对MS生物膜抑制作用：未经过pH调节和超滤处理的五种LB上清液都能抑制MS及其生物膜生长(P<0.05),经过pH调节和超滤处理的L. casei Shirota和L. rhamnosus HN001的上清液对MS生物膜仍有抑制效果(P<0.05)3.LB上清液SDS-PAGE:L. casei Shirota和L. rhamnosus HN001的上清液在6.5kDa处与MRS肉汤对照组相比可见增强的一条条带。4.LB对MS临床分离株的抑菌作用：L. casei Shirota, L. casei LC01, L. plantarum ST-Ⅲ, L. paracasei Lpc-37对高龋儿童唾液中MS抑制率分别为72.27%、62.82%、64.42%、68.58%,混合培养后四种LB对变形链球菌均有抑制作用(P<0.05)。L. casei Shirota, L. casei LC01, L. plantarum ST-Ⅲ, L. paracasei Lpc-37能够显著减少生物膜中链球菌和MS的数目(P<0.05),同时自身的粘附量未见显著增加(P>0.05)。[结论]五种LB菌株(L. casei Shirota, L. casei LC01, L. plantarum ST-Ⅲ, L. paracasei Lpc-37, L. rhamnosus HN001)均可抑制MS的生长；LB各菌上清液能够抑制变MS生物膜的生长,发挥抑菌的作用可能为其中的6.5kD的多肽；同时五种LB对高龋儿童口内MS临床分离株有较强抑制作用,提示对于龋病预防可能具有良好的应用前景。