论文部分内容阅读
‘耐冬’为常绿阔叶灌木或小乔木，山茶科山茶属植物，主要分布于青岛崂山及长门岩等岛屿，为我国山茶自然分布的最北端。‘耐冬’四季常青，花色艳丽，花型优美，花期持久，傲雪凌霜，其种苗目前仍以传统的籽播、扦插、嫁接等方式繁殖为主。但因其分布狭窄，种子和种苗来源严重不足，难以满足种苗和商品苗市场的需求。本项目主要以‘耐冬’子叶作为外植体，对其愈伤组织再生植株了系统地研究，并获得了优化的‘耐冬’未成熟果消毒方式及时间、有效防止‘耐冬’试验材料（上、下胚轴，茎段及根段等）褐变的方法、‘耐冬’愈伤组织诱导的培养条件、‘耐冬’愈伤组织诱导、增殖以及不定芽分化的激素搭配，‘耐冬’再生植株的生根方式以及驯化、移栽方法。主要研究结果如下：⑴‘耐冬’未成熟果消毒方式及时间对较幼嫩的山茶未成熟果连同果皮消毒，而成熟的山茶果则剥去果皮后对成熟胚进行消毒；500mL的0.1%HgCl2在配制时添加10ml吐温20以及23滴1mol·L-1的HCl溶液；使用该种升汞溶液消毒8min，再用无菌水冲洗56遍，清洗完毕后将未成熟果/种子铺在有滤纸的培养皿里，待吹干材料表面水分后再进行下一步实验操作，可获得较佳的消毒效果。⑵‘耐冬’试验材料抗褐变的有效方法在培养基中添加0.2%的PVP，并将其置于弱光条件下培养，可以有效防止外植体的褐变情况。⑶‘耐冬’愈伤组织诱导的培养条件以及激素配比优化通过DPS软件进行3因素4水平的正交试验设计，研究蔗糖浓度、生长素与细胞分裂素配比对‘耐冬’愈伤组织的诱导率的影响，试验结果表明：在光照条件下，优化后的蔗糖浓度及激素配比为MS+30g·L-1蔗糖+0.5mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA，其愈伤组织诱导率最高可达94.5%；在黑暗条件下，优化后的蔗糖浓度及激素配比为MS+50g·L-1蔗糖+1.0mg·L-12,4-D+2.0mg·L-16-BA，其愈伤组织诱导率最高可达98.57%。黑暗条件下培养诱导的愈伤组织的诱导时间较光照条件下的更短，生长量更大，且诱导率更高；但光照条件下的愈伤组织状态更利于不定芽的分化。⑷‘耐冬’愈伤组织增殖与不定芽分化诱导激素配比的优化优化后的愈伤组织增殖培养基为MS+0.1mg·L-1NAA+2.0mg·L-16-BA；经过2次转接继代培养后，将质地密实、奶黄色或淡黄色、表面富有水润光泽的愈伤组织转入不定芽分化培养基MS+0.5mg·L-1NAA+10.0mg·L-16-BA进行不定芽的分化诱导，不定芽的分化率达34.32%。⑸‘耐冬’不定芽的生根‘耐冬’不定芽的生根诱导方法是将切割为单芽的芽条基部浸没在500mg·L-1的IBA溶液中60min，再转接到MW液体培养基的滤纸桥上，于弱光(100200μmol·m-2·s-1)下培养，生根率达50%。