一株猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

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近十几年来,为防治疾病及促进生长,大量抗菌药物应用于集约化养猪生产中。抗菌药物长期、广泛和不合理使用以及抗菌药物的选择压力等原因使大肠杆菌耐药菌株不断增多、耐药谱不断扩大,有的菌株甚至对尚未用于临床的新型抗菌药物也表现出了耐药性。因此,积极开展猪源大肠杆菌耐药性监测,阐明耐药表型与基因型特征,将有利于遏制大肠杆菌耐药性发生发展,优化抗菌药物的合理应用,通过联合用药有利于防治大肠杆菌。本文采集猪场患病猪只的病料,经细菌分离纯化,运用细菌培养特性试验、生化试验和16s rRNA测序鉴定等方法鉴定临床分离菌株。该分离菌为一株致病性大肠杆菌。通过WHO推荐的Kirby-Bauer(K-B)法测定其对24种抗菌药物的耐药性。根据药敏试验结设计了13对引物分别为TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-1、OXA-2、CMY-4、OXA-10、erm、ant(6)-iv、aac(6′)/aph(2″)、tetM,并扩增细菌基因组的耐药基因。采用微量肉汤稀释法测定加替沙星、头孢噻肟钠、丁胺卡那、庆大霉素、磷霉素和盐酸左旋氧氟沙星分别对猪源大肠杆菌耐药菌株的最低抑菌浓度(minimuminhibitory coneentration,MIC)。采用6×6棋盘法分别测定了加替沙星与其余五种抗生素的体外联合抗菌活性。试验结果表明,从培养特性、生化试验说明所分离菌株为大肠杆菌。16s rRNA测序结果表明分离菌株与大肠杆菌E482(Escherichia coli E482)同源性达99.9%。药敏试验结果表明分离株大肠杆菌对于阿莫西林、氨苄西林、青霉素、头孢噻呋钠、新霉素、庆大霉素、安普霉素、克林沙星、环丙沙星、恩诺沙星、盐酸左旋氧氟沙星、强力霉素、土霉素、红霉素、磷霉素、氟苯尼考高度耐药(R),对于哌拉西林、比阿培南、粘杆菌素耐药(R),对于头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南中度敏感(I),对于美罗培南、丁胺卡那敏感(S)。加替沙星、头孢噻肟钠、丁胺卡那、庆大霉素、磷霉素和盐酸左旋氧氟沙星分别对猪源大肠杆菌耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC)分别为16ug/ml、64ug/ml、256ug/ml、512ug/ml、512ug/ml、256ug/ml。加替沙星与庆大霉素的FIC为0.5;加替沙星与盐酸左旋氧氟沙星的FIC为0.375;加替沙星与头孢噻肟钠的FIC为0.75;加替沙星与丁胺卡那的FIC为0.625;加替沙星与磷霉素的FIC为0.75。该株分离菌与大肠杆菌E482(Escherichia coli E482)同源性达99.9%,该大肠杆菌耐受多种药物,扩增发现大肠杆菌基因组内存在tetM基因、ant(6)-iv基因、OXA-1基因、CTX-M-9基因、TEM基因。联合药敏试验结果显示加替沙星与庆大霉素、盐酸左旋氧氟沙星体外联合表现为协同作用,加替沙星与头孢噻肟钠、丁胺卡那、磷霉素体外联合表现为相加作用。
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