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目的明确健脾软肝方抗肝纤维化的作用是否与干预基底膜形成有关,并探讨其作用机制,为中医临床形成更为有效的治法方药提供理论依据和实验研究基础。方法将72只Wistar雄性大鼠编号,根据随机数字,随机分为6组,即正常组、模型组、阳性对照(扶正化瘀胶囊)组、健脾软肝方高、中、低剂量组,每组各12只。模型的复制采用腹腔注射30%CCl4与70%橄榄油混合液,按2m L/1kg计算,每周两次,共4周。造模的同时,从第1周开始给药,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,健脾软肝方高、中、低剂量组给予不同剂量的健脾软肝方灌胃,阳性对照组给予扶正化瘀方灌胃。4周末进行以下指标的观察:采用病理切片(HE染色、Mallory染色)观察大鼠肝纤维化的程度;采用电子显微镜观察肝窦内皮下基底膜的超微结构;采用Q-PCR检测ColⅣ、LN m RNA的表达水平;采用免疫组化ABC法检测LN蛋白的表达水平。结果1.一般情况:正常组大鼠活动如常,毛发有光泽,饮食量正常;模型组大鼠活动减少,精神萎靡,毛发无光泽,有腹泻,饮食量减少;阳性对照组、健脾软肝方高、中、低剂量组大鼠与模型组比饮食量、活动度、毛色光泽较好。模型组大鼠死亡率较高。2.肝脏大体形态及肝指数:正常组大鼠肝脏呈暗红色,表面光滑,包膜完整,有光泽,质软,边缘锐利;模型组大鼠肝脏体积增大,颜色变浅,包膜紧张,有细颗粒状突起,无光泽,质地变硬,边缘变钝;阳性对照组、健脾软肝方高、中、低剂量组大鼠肝脏颜色、光泽、质地介于正常组与模型组之间。阳性对照组、健脾软肝方高、中、低剂量组、模型组大鼠肝指数较正常组均增高,正常组、阳性对照组、中剂量组、低剂量组大鼠肝指数较模型组均降低,但高、中、低剂量组之间肝指数的升高与降低并不呈一定的药物依赖关系。3.光镜观察(HE染色、Mallory染色):正常组大鼠肝小叶结构完整,中央静脉位于肝小叶中央,肝索以中央静脉为中心呈现放射状,肝细胞大小均匀,肝细胞核呈圆形,在汇管区、小叶间隔处可见少量胶原纤维;模型组大鼠肝小叶结构被破坏,从中央静脉和汇管区伸出粗大的胶原纤维条索分割,包绕肝小叶,可见脂肪变性及细胞水肿,肝索排列紊乱,胶原纤维增生、沉积,呈弥漫分布;阳性对照组、健脾软肝方高、中、低剂量组大鼠肝组织较模型组大鼠肝组织可见肝小叶破坏减少,胶原纤维沉积减轻,胶原纤维面积相对更小,脂肪空泡数量减少,肝纤维化的程度均减轻。4.电镜观察:正常组大鼠肝窦内皮细胞呈扁平状,远侧胞质成薄片状、有许多不连续的窗孔,内皮下未见基底膜,Disse间隙内有大量的肝微绒毛和少量的胶原纤维;模型组大鼠肝窦内皮细胞窗孔数目减少甚至消失,Disse内间隔可见胶原纤维束,甚至局部的内皮下可以见到连续的基底膜;阳性对照组、健脾软肝方高、中、低剂量组大鼠肝窦内皮细胞窗孔直径变小、数目减少,范围较模型组小,内皮下未见到基底膜,Disse间隙内有少量的肝微绒毛。5.ColⅣ、LN的mRNA表达水平:与正常组比较,模型组ColⅣ、LNmRNA表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,ColⅣ的m RNA表达水平中剂量组、阳性对照组均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但高、中、低剂量组之间ColⅣm RNA表达水平降低并不呈一定的药物依赖关系;LN的m RNA表达水平阳性对照组、高、中、低剂量组均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),而且高、中、低剂量组之间LN m RNA表达水平均降低呈现一定的药物依赖关系。6.LN的蛋白表达水平:与正常组比较,模型组LN蛋白含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组、高、中、低剂量组中LN蛋白含量降低差异具有统计学意义(P<0.05),而且高、中、低剂量组之间LN的蛋白表达水平的降低呈现一定的药物依赖关系。结论健脾软肝方对大鼠肝纤维化基底膜形成具有改善作用,其机制与健脾软肝方抑制肝组织ColⅣ、LN表达有关。