鼠抗禽网状内皮组织增殖病病毒gp90多抗的研制及gp90在昆虫细胞中的表达

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禽网状内皮组织增生症病毒(REV)是禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis)的病原,属逆转录病毒科的C型病毒。该病毒主要感染火鸡,也能引起鸡、鸭等禽类以淋巴-网状细胞增生为特征的肿瘤性的病理综合征。主要侵害宿主的淋巴细胞或网状内皮细胞,严重影响宿主免疫系统的功能,诱发细胞免疫和体液免疫抑制,降低机体对其它病原或抗原的免疫应答,导致不同程度的继发、二重感染和多重感染,减弱鸡群对各种疫苗的免疫力,加剧某些疾病的临床表现。目前REV在我国的流行越来越严重,在某些鸡场中对REV阳性抗体的检出率高达21.4%-71%,其中出现免疫抑制状态的鸡群对REV抗体的阳性检出率要比正常鸡群高的多。 GP90是REV病毒env基因编码的表面囊膜糖蛋白,是病毒的主要免疫蛋白,含有顺序和构象表位,具有受体结合功能,能诱导感染宿主产生较高水平的保护性抗体。对不同地区不同时间分离的REV全基因组测序表明,env基因序列同源性在92%以上,其不同主要由编码gp90的基因引起,提示gp90可能与病毒的变异、毒力、致病性、致病机理等有关。 本研究将含有经EcoRI和SalI双酶切和基因测序鉴定正确的gp90基因的重组质粒pGEX-6P-1-gp90转化进宿主菌BL21中,在37℃ 0.5mMIPTG诱导下,gp90基因以融合蛋白的形式获得了良好的表达,表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,证实其表达的融合蛋白的大小为64KD,表达形式为包涵体。通过包涵体纯化的方法,将获
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