杨梅苷降脂与抗炎功能的评估及其分子机理研究

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杨梅是一种广受欢迎的水果,果味酸甜适中,既可直接食用,又可加工成杨梅干、酱、蜜饯等,还可酿酒,有止渴、生津、助消化等功能。杨梅中含有许多功能性活性成分,具有多种生物学功能。杨梅苷(myricitrin,MYR)是杨梅的主要活性成分之一,研究发现MYR可能具有降脂与抗炎功能,但其作用机理尚不清楚。本论文采用高脂饮食(high fatdiet,HFD)诱导的小鼠肥胖动物模型和油酸(oleic acid,OA)诱导的肝癌细胞HepG2模型,评估MYR的降脂功效并探索其作用机理;利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型,评估MYR的抗炎功效并探索其作用机理,将为以杨梅为原料,深度开发减缓高脂血症及慢性炎症的功能性食品提供理论依据。1.MYR降脂作用及其分子机制将30只C57BL/6雄性小鼠随机的分为对照组(control,Con)、HFD组和MYR保护组,MYR保护组的小鼠使用100 mg/kg.bw/day MYR对小鼠进行灌胃直至实验结束。结果显示MYR保护后小鼠的体重、肝脏重量、脾脏重量和脂肪组织重量显著降低,而且小鼠血液中的甘油三酯(totaltriglyceride,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein,LDL-C)的含量都降低,而高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein,HDL-C)的含量上升。通过对小鼠的肝脏及脂肪组织进行苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining,H&E)染色分析,发现高脂组的中肝细胞有许多脂肪空泡和脂滴积聚,且肝脏明显变性。MYR能够减缓这些肝脏病变、抑制脂滴发展,并且减少脂肪细胞的肥大。通过对小鼠肝脏蛋白及RNA的提取并使用蛋白质印迹法(Western blotting)及实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)实验检测发现,MYR能调节相关脂代谢基因如过氧化物酶增殖激活的受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)、沉默信息调节因子1(silence information regulation factor 1,SIRT1)、固醇调和元件结合蛋白-1c(sterol harmonic element binding protein-1c,SREBP-1c)、脂肪酸转位酶(cluster of differentiation 36,CD36)、乙酰辅酶 A 羧化酶(acetyl coenzyme A carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)等的表达异常。并且对HFD诱发的肝脏慢性炎症中,MYR也可抑制其炎症因子如白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素 6(interleukin6,IL-6)和一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)的表达上调。结果表明MYR对HFD所导致的高脂血症有缓解作用,MYR可能通过激活AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)及PPAR通路来发挥降脂作用,并且能抑制由HFD引发的炎症。2.MYR抗炎作用及其分子机制在实验构建的炎症细胞模型中,MYR可抑制由LPS刺激所诱发的炎症因子如 IL-6、IL-1β、iNOS、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA及蛋白水平的表达升高,且呈剂量依赖性。通过使用Western blotting和qRT-PCR及荧光素酶报告基因技术,发现MYR可抑制由LPS诱导的细胞中的转录因子的升高,而MYR组核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)与激活子蛋白-1(activator protein 1,AP-1)的荧光素酶活性相对于LPS组明显下降。MYR通过抑制NF-κB和AP-1活性调控下游基因蛋白的表达发挥缓解炎症的效果。
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