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目的建立不同浓度乙醇诱导的体外肝细胞损伤模型,探讨不同浓度乙醇对L-O2细胞肝酶泄漏量、氧化应激、脂质过氧化及NF-KB1(P65)蛋白表达的影响。并确定枳椇子水提取液对乙醇诱导的体外肝细胞损伤是否有防治作用及其机制。方法采用MTT法筛选乙醇诱导肝细胞损伤的适宜浓度(0.3%、0.6%、1.2%、2.4%),选择最适浓度的枳椇子水提取液对损伤模型进行干预,原位装载探针法测定细胞内ROS水平,全自动生化仪检测培养上清液ALT、AST泄露量,试剂盒检测细胞内MDA、GSH含量,免疫细胞化学法检测细胞内NF-KB1(P65)蛋白的表达强度及定位。结果1.MTT法示当乙醇浓度低于0.2%时细胞成活率比正常组稍高。当乙醇浓度大于0.3%时,细胞存活率随浓度升高而降低但均大于80%。当乙醇浓度大于2.4%时,与正常组相比细胞存活率下降最明显(P<0.05)且大部分细胞漂浮,因此选定0.3%-2.4%浓度为最适损伤浓度。2.ROS结果显示正常组细胞内可见少量较弱荧光。随乙醇浓度增加荧光增多增强,2.4%乙醇组最强,但细胞数量减少。加入枳椇子水提取液治疗后各组荧光均减弱。3.乙醇干预肝细胞后培养上清液ALT、AST均比正常组升高(P<0.05),且随乙醇浓度升高而升高。加入枳椇子水提取液治疗后均下降(P<0.05)。4.乙醇作用于肝细胞后细胞内MDA均比正常组升高(P<0.05),且随乙醇浓度升高而升高。而GSH则比正常组下降(P<0.05),且随乙醇浓度升高不断下降。加入枳椇子水提取液治疗后MDA均下降而GSH均升高(P<0.05)。5.免疫细胞化学示正常组肝细胞胞浆内有少量NF-KB1(P65)蛋白表达。随乙醇浓度增加,胞浆胞核内该蛋白表达增加(P<0.05),但1.2%乙醇组与2.4%乙醇组无明显差异(P>0.05)。枳椇子水提取液治疗后表达减弱(P<0.05)。结论1.在一定浓度范围内,低浓度乙醇可能对肝细胞生长有促进作用,超出一定范围后,乙醇浓度越高对肝细胞损伤越大。2.乙醇单独作用于肝细胞即可发生氧化应激、脂质过氧化并使NF-KB1表达上调而致损伤,且损伤程度均随乙醇浓度增加而加重。3.枳椇子水提取液可能通过降低NF-KB1的表达而减轻炎症损伤,削弱氧化应激和脂质过氧化水平对酒精性肝损伤有防治作用。但其对正常细胞无明显影响。