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人参（Panax ginseng C．A．Meyer）为五加科人参属多年生草本植物，是我国传统名贵中药，在中国、朝鲜、日本乃至亚洲国家被广泛用于滋补保健和医疗，对治疗心血管疾病、糖尿病、精神类疾病有较好的疗效。现代药理学研究发现，人参具有明显的抗癌效果，其主要的活性成分为人参皂苷，人参皂苷是由糖和苷元相构联而成的糖苷类化合物。人参皂苷口服后，在胃液、胆汁的作用下仅发生了轻微的氧化作用，不能被降解；只有在肠内菌的作用下，糖苷键才发生断裂，形成了一系列代谢产物。最新的药理学研究表明：被吸收入血并发挥抗癌活性的不是皂苷本身，而是其代谢产物M1。代谢物M1经血液进入肝脏后，发生酯化反应形成了脂肪酸酯类化合物EM1。由于EM1对细胞的毒性降低，在体内的保留时间延长，对宿主细胞的免疫调节能力增强，因此，EM1比M1有更强的抗癌活性。目前，国内外学者获取M1特别是EM1的途径，主要是通过肠内菌代谢及口服给药后从动物的血液、肝脏中分离获得，由于方法复杂，分离困难，得率极低，仅得到一系列M1脂肪酸单酯的混合物EM1，没能分离得到单体并确定具体结构。阻碍了这一理论的深入研究与发展。 本试验的研究，首先采用植物化学法分离获得分组皂苷及单体皂苷，其次借助酶工程技术，参照人参皂苷肠内菌代谢机理，在体外对人参皂苷酶代谢机理进行研究，探求二者代谢机理的相关性，代谢产物的一致性，尝试用酶代谢理论重新定义并解释肠内菌代谢，促进这一领域的研究向分子水平上发展。依据酶的特点，筛选出将原人参二醇型皂苷代谢成M1的专属性酶，进而大量富集代谢物M1，然后，采用组合化学法，模拟肠内菌代谢物M1在肝脏中的脂肪酸酯化，将酶代谢物产物M1在体外脂肪酸酯化，合成M1脂肪酸单酯的混合物EM1，分离得到单体，确定化学结构；进行药理学观察，评价其抗癌活性。 本试验采用有机溶剂提取、萃取、犬孔吸附树脂层析、硅胶柱层析等方法，从人参中分离得到了人参皂苷Re、Rb1，对它们进行了物理、化学及波谱分析，确定了结构。在大孔树脂D101、NKA-12的比较研究中发现，NKA-12对人参皂苷有较好的吸附分离效果，经乙醇梯度洗脱可以直接分离得到人参皂苷Re。这一成果的完善，有利于Re的工业化生产。 在恒温水浴条件下，用酶NS37040对人参皂苷单体Rb1、Re进行了酶解试验，酶解后的样品经酶灭活、离心、萃取、浓缩，再上硅胶柱层析分离纯化，得到了吉林农业大学博士学位论文摘要人参皂普Rb，的三种主要酶解产物，利用物理、化学及波谱分析，对它们进行了分析鉴定，确定它们分别是Ginsenoside一Rd、Metab。liteMI、20（S）一Pr。topanaxa-d 1 01。在酶解样品中，通过物理、化学、TLe、HPLC也发现了G insenos ide一FZ的存在，由于G insenoside一FZ含量少，没有对其分离纯化。M。tabolit。Ml是人参中不存在的成分，所以对它进行了详尽的波谱【质谱（MS）、红外（lR）、核磁（NMR、多种ZDNMR）]分析，确定了其化学结构。依据上述的试验结果，明确了Rb，的代谢途径为Ginsenoside一Rb，、Ginsenoside一Rd、Ginsenoside一F:*Metabolite一1--+20（S）一protopanaxadiol。对Re的酶解产物进行了分析，确定了其代谢途径为G insenoside一Re*Ginsenoside一Rg，“Ginsenoside一Rh，一20（S）一ProtoPanaxatr一1 01。上述结论与国内外学者用肠内菌对人参皂普Rb，、Re的代谢途径及产物基本一致。酶是由细胞产生的具有催化能力的蛋白质，新陈代谢是生命活动的最重要特征。一切生命活动都是由代谢的正常运转来维持的，而生物体代谢中的各种化学反应都是在酶的作用下进行的;人体肠内菌多达100余种，且99%为厌氧菌，这些厌氧菌分泌各种各样的酶，其活性也相当高。那么究竟是肠内菌还是其分泌的酶参与了人参皂普的代谢?结合本试验结论及肠内菌、酶的特点，作者推断:肠道内直接参与人参皂普代谢的是肠内菌分泌的酶，而非肠内菌。这一结论对于在分子水平上研究人参皂普的代谢有一定的参考价值。 采用Ag 1 lentll00高效液相色谱仪对酶解总皂普样品中M1、Rg。含量进行了测定，确定Ml最佳酶的转化率为8.36%; Rg3最佳酶的转化率为2.58%。 采用正交试验设计系统研究了不同酶、温度、时间对MetaboliteMI、Ginsenoside一Rg3转化率的影响，结果发现酶、温度、时间对Metabolite Ml的转化率有极显著的影响。并且，最佳的酶为NS 44018，最佳时间为20天，最佳温度为50oC。Metabolite Ml的转化率可达8.36%。酶、时间对Ginsenoside一Rg3的转化率也有显著的影响，而温度对G ins。n。5 ide一Rg。的转化率无显著影响，最佳酶为NS 44066，最佳时间为1天。酶作为生物大分子其作用的最佳的温度、时间各不相同，并且对底物化学结构、作用位置都有极强的选择性。通过对不同人参皂普专属酶的筛选可以定向酶解，大量获得目标化合物。本试验已初步筛选出对M1、Rg。作用专属性较强的酶及反应条件，这一成果完善将为创新药物的研发、工业化生产莫定理论基础。 采用5 ohotten一Baumann方法，将获得的代谢物M1与脂肪酸进行化学合成，将合成产物萃取、离心、浓缩，经硅胶柱层