干扰素(Interferon,IFN)具有增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞活力和抗病毒、抗肿瘤、免疫调节功能等多种生物活性,作为广谱抗病毒剂被广泛使用。干扰素在发挥作用的过程中不能直接杀伤或抑制病毒,而是通过与细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而达到抑制病毒复制的作用。本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞(CRL2845)中扩增获得猪IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48h后通过Western blot分析pIFN-λ3瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于PK15、MDCK、Vero细胞,进行pIFN-λ3抗表达绿色荧光蛋白的重组水疱性口炎病毒(VSVG)的活性分析;进而将pIFN-λ3基因克隆到杆状病毒穿梭载体pFastBacl中,采用热激法将重组穿梭质粒pFB-pIFN-λ3转化至DH10(?)Bac大肠杆菌感受态细胞;使用蓝白斑筛选技术获得重组杆粒rB-pIFN-λ3;采用阳离子转染方法将重组杆粒rB-pIFN-λ3转染至贴壁SF9细胞,拯救重组杆状病毒rBV-pIFN-λ3。重组杆状病毒扩大培养至第三代,同时利用Western blot方法检测pIFN-λ3蛋白的表达情况;使用无血清表达系统大量制备pIFN-λ3,收集细胞培养上清,采用蔗糖垫超速离心、蔗糖密度梯度离心策略进行纯化,Western blot鉴定pIFN-λ3的表达后,测定活性,取100U pIFN-λ3蛋白分别作用于PK15、MDCK、Vero细胞,进行pIFN-λ3体外针对VSVG、猪流行性腹泻病毒(PEDV)的抗病毒活性分析。结果显示,本研究成功扩增获得pIFN-λ3基因,并在293细胞内成功表达;瞬时表达能够抑制VSVG在PK15、MDCK、Vero细胞上的增殖;重组杆粒rB-pIFN-λ3构建成功,杆状病毒表达系统表达的pIFN-λ3蛋白能与His-tag抗体发生特异性反应,表明成功表达了 pIFN-λ3蛋白且具有反应原性;干扰素活性测定结果为 1.3×105U/mL,取 100U pIFN-λ3 蛋白分别作用于 PK15、MDCK、Vero 细胞,结果表明,pIFN-λ3干扰素蛋白可以在体外抑制VSVG在PK15、MDCK、Vero细胞上的增殖,也可以在体外抑制PEDV在Vero细胞上的增殖。