枯草芽胞杆菌TR21的剂型应用技术研究和活性物质分离纯化

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枯草芽胞杆菌TR21在盆栽和大田试验中对香蕉枯萎病均具有较好防效,为探索TR21菌株制备的可湿性粉剂和原粉的田间应用技术,论文首先研究香蕉生产中常用的杀细菌剂、杀真菌剂、肥料、植物生长调节剂与可湿性粉剂混用的可行性,测定了上述因子对TR21可湿性粉剂中芽胞存活的影响;然后基于TR21菌株诱导抗性的原理,利用TR21原粉开发了栓剂,并开展了盆栽防效验证;最后还对TR21产生的拮抗蛋白和脂肽开展了分离纯化研究,为进一步改良TR21剂型提供了理论依据。其结果如下:1.香蕉生产中常用的杀细菌剂、杀真菌剂、肥料和植物生长调节剂对TR21可湿性粉剂中芽胞存活的影响。植物生长调节剂0.136%赤霉素·吲哚乙酸·芸苔素内酯可湿性粉剂对TR21的芽胞存活没有影响;杀细菌剂80%水合霉素可湿性粉剂和20%噻菌铜悬浮剂处理后的第7d对TR21的芽胞存活有显著影响,杀细菌剂2%春雷霉素+45%工铜可湿性粉剂处理后的第15d对TR21的芽胞存活有显著影响;杀真菌剂20%多菌灵+30%福美双可湿性粉剂处理的当天和第7d对TR21的芽胞存活有显著影响;尿素、高浓度硫酸钾复合肥、农用硫酸钾对TR21的芽胞存活无影响。2.利用TR21原粉开发栓剂,并在温室对盆栽粉蕉开展叶腋接种TR21原粉或叶柄插入TR21栓剂防治枯萎病的试验,效果不理想,接种香蕉枯萎病病原菌后60d统计防治效果分别为9.68%和-14.52%。3.利用不同浓度饱和硫酸铵沉淀枯草芽胞杆菌TR21LB培养基24h发酵液,发现20%硫酸铵沉淀得到的粗蛋白对香蕉枯萎病4号生理小种具有最高的拮抗活性。该粗提蛋白耐100℃高温,在pH6-10和紫外线照射的环境中拮抗活性较稳定,并对胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K均不敏感。通过采用离子交换和疏水层析法对该拮抗粗蛋白分离纯化,SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳验证拮抗蛋白纯度,初步判定该拮抗蛋白的分子量为36kDa左右。4.采用AB SCIEX公司的4000QTRAP串联四级杆-线性离子阱复合型质谱仪对TR21发酵液中的脂肽粗提物进行分析,发现TR21产生的脂肽类物质中含有具诱导植物产生系统抗性功能的surfactin(表面活性素)成分,包括分子量为1008D,1022D和1036D的三个同系物。
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