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莲子心系睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的成熟种子的干燥幼叶及胚根。性味苦寒,归心、肺、肾三经,具清心去热,固精止血之功效。中医用于热入心包、心肾不交、失眠遗精、血热吐血等证的治疗。现代药理研究证明其具有抗心律失常、抗心肌缺血、抗血小板聚集、抗癌、抗HIV、逆转化疗耐药、增强抗肿瘤及提高免疫功能的功效。目前,国内外关于莲子心的提取方法和质量控制研究,都不太深入,主要围绕其弱极性化合物-生物碱类成分进行研究,如:采用简单的酸碱法分离生物碱,测定单个或几个生物碱来进行质量控制。但从莲子心的多种功效,多种用途可以看出,必须从整体观念出发,对莲子心进行全面系统研究,一方面应采用现代提取分离新技术结合实验优化设计方法,研究生物碱和其他成分的提取分离;另一方面应采用多种色谱指纹技术结合化学计量学方法对莲子心中弱、中和强极性成分进行全面控制,为中药质量控制提供新思路。
本论文主要包括以下几方面:
一、为了提高莲子心生物碱的提取率,系统研究了不同提取溶剂和方法对其提取的影响;然后采用Box-Behnken设计-响应面分析-加速随机算法等现代数据处理方法优化了其提取工艺参数。
二、以吸附量、解吸率为指标,对多种不同类型大孔吸附树脂纯化莲子心总生物碱的方法进行研究,获得了满意的工艺参数。粗提物经优化工艺处理后,总固物的得率仅为纯化前总固物的11.58%,纯化后仅其中一个生物碱-甲基莲心碱在总固物的含量就达38.39%,保留率达87.56%,为研制莲子心有效部位新药提供了基础。
三、研究了影响莲子心总生物碱稳定性的因素,如:pH值、离子浓度、温度、湿度和光照等。得知莲子心总生物碱应该在避光、干燥的条件下保存,在制备与其有关的制剂时应尽量制成固体制剂,如制成液体制剂,则应严格控制溶液的pH值,同时进行适当处理以消除溶液中可能存在的三价铁离子及其他金属离子的影响,提出了中药半成品在制剂前也应进行稳定性研究的新观点。
四、采用高速逆流色谱法,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统,从莲子心中成功分离得到了高纯度的莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱,克服了传统柱色谱操作复杂,产品得率低的缺点。
五、为了充分利用莲子心药材,对其非生物碱类成分-多糖进行研究,采用正交试验法优化了影响多糖提取的因素,确定了最佳提取工艺,为进一步研究莲子心多糖的结构和药理作用提供基础。
六、首次采用亲水作用色谱和反相色谱两种色谱模式,对莲子心中弱极性、中极性和强极性成分进行全面分析和研究,用相似度和主成分分析考察不同产地和不同采收时间莲子心的关系,然后利用HPLC-DAD提供的光谱与色谱信息,采用化学计量学二维数据解析方法-光谱相关色谱法,对两种色谱模式光谱色谱指纹图谱(Spectrochromatogram)中的组分相关性进行判断。相似度和主成分分析结果显示:2种色谱模式反映的化学信息并不相一致,即在反相色谱模式中相似度高的样品,在亲水色谱模式中可能低,在反相色谱模式下聚为1类的样品,在亲水色谱模式下可能聚为另1类。光谱相关色谱结果也显示2种指纹图谱中色谱峰的基本无相关性,说明亲水作用色谱可提供反相色谱所不能反映的信息。最后,将这2种色谱模式结合起来建立了莲子心指纹图谱。该方法能为全面控制莲子心药材质量提供参考,也为中药指纹图谱的研究提供新思路。