论文部分内容阅读
目的:本实验选用3种不同艾灸时长治疗兔膝骨关节炎模型,通过检测不同时长艾灸治疗下膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔膝骨关节软骨基质蛋白多糖和CHI3L1基因表达水平,观察不同时长艾灸治疗对KOA兔膝关节软骨基质蛋白多糖和CHI3L1基因表达水平的调节作用,探讨其可能存在的机制,旨在为进一步的相关基础研究和临床艾灸治疗提供实验参考依据。方法:选用6至10月龄健康日本大耳白兔50只,雌雄各半,体重2.5±0.5kg。将50只日本大耳白兔随机分为5组,每组10只:10分钟治疗组(10min组)、20分钟治疗组(20min组)、40分钟治疗组(40min组)、空白对照组(空白组)、模型组。对治疗组(10min组、20min组、40分钟组)和模型组均采用右侧兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液的方法制备兔KOA模型。造模成功后开始进行艾灸治疗,穴位取右侧“内膝眼”和“外膝眼”,采用温和灸法,对三个治疗组分别治疗10分钟、20分钟、40分钟(分别对应10min组、20min组、40min组)。艾灸治疗1次/日,5日/疗程,疗程间休息2日,共计4疗程。空白组和模型组不进行任何治疗。治疗结束后取各组动物右侧膝关节股骨内侧髁的软骨、滑膜组织和相关周围组织,用HE染色、番红O/固绿染色、阿尔辛蓝染色进行病理形态学分析,用RT-PCR法检测CHI3L1基因表达水平。实验数据采用SPSS22.0进行统计分析,计量资料采用x?±s表示,采用正态性检验、方差齐性检验对数据分布进行检验。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用最小显著差异法(LSD法),相关性分析采用Pearson相关。显著性水准α=0.05。结果:1.滑膜HE染色:病变程度(主要为炎症程度)由弱至强:空白组<40min组<20min组≤10min组<模型组(1)空白组滑膜形态结构较清晰,未见组织学病理改变。(2)40min组和空白组相比,有少量炎症浸润:滑膜的疏松结缔组织中少量炎症细胞散在浸润,炎症细胞为淋巴细胞,浆细胞和巨噬细胞,属于慢性炎症过程。(3)20min组相比40min组,炎症程度更严重。滑膜局部区域可见中等数量炎症细胞散在浸润,炎症细胞为中性粒细胞,淋巴细胞和浆细胞;属于慢性炎症反应过程。(4)10min组相比20min组,炎症程度大部分区域基本无明显差异,但是10min组滑膜局部区域可见较多炎症细胞散在或灶性浸润,10min组比20min组的炎症程度稍重。(5)模型组是所有组中病变最严重的组,可见多量中性粒细胞及脓细胞浸润,局部组织坏死、见少量核碎片,亦见有较多淋巴细胞和浆细胞浸润。2.番红O/固绿染色测GAG含量:空白组OD值均高于模型组、10min组、20min组(p<0.05);模型组OD值小于10min组、20min组、40min组(p<0.05);10min组和20min组OD值均低于40min组(p<0.05);10min组、与20min组间差异无统计学意义(p>0.05)。3.阿尔辛蓝染色测PG含量:空白组的OD值均高于模型组、10min组、20min组(p<0.05);模型组的OD值小于10min组、20min组、40min组(p<0.05);10min组和20min组的OD值均低于40min组(p<0.05);10min组、与20min组间差异没有统计学意义(p>0.05)。4.CHI3L1基因表达水平:空白组的基因表达均低于模型组和40min组(p<0.05);模型组的基因表达小于40min组,但高于10min组和20min组(p<0.05);10min组和20min组的基因表达均低于40min组(p<0.05);10min组、与20min组间的基因表达差异无统计学意义(p>0.05)。5.软骨基质蛋白多糖和CHI3L1基因表达水平的相关性分析:模型组的软骨基质蛋白多糖含量与CHI3L1基因表达水平呈负相关,相关系数r=﹣0.758,p=0.011;艾灸治疗组中软骨基质蛋白多糖含量与CHI3L1基因表达水平的相关性无统计学意义。结论:1.本实验采用兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液的方法建立兔KOA模型,其方法可靠、可重复、适用易控、成功率高,尽可能地避免了因造模不当和其他不必要的侵入性损伤造成的出血、感染、炎症等。2.不同时长艾灸对KOA病程中软骨基质损害具有保护、改善的作用,能够改善滑膜炎症,有效抑制、减缓KOA的病程进展和软骨破坏。其中40min组改善程度最为明显。3.KOA病程中,软骨基质中CHI3L1基因表达增高。较短时长(10min和20min)艾灸能够抑制软骨基质中CHI3L1基因表达水平。相反,较长时长(40min)艾灸能够提高软骨基质中CHI3L1基因表达水平。4.(1)KOA病程中,软骨基质蛋白多糖含量与软骨基质中CHI3L1基因表达呈负相关,即KOA病程中,软骨基质蛋白多糖含量下降,软骨基质中CHI3L1基因表达增高;(2)不同时长艾灸能够对软骨基质中蛋白多糖含量和CHI3L1基因表达起调节作用,改变其原“负相关性”。