【摘 要】
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目的:观察清热解毒方与软坚散结方对人肺腺癌A549细胞的生长、增殖和凋亡的影响,进而对两种中药方剂对A549细胞凋亡的影响进行比较,并观察Bcl-2 mRNA在A549细胞中的表达情况。方法:将人肺腺癌A549细胞进行体外培养,选择对数生长期、生长状态良好的A549细胞随机分为3组:两种不同功效中药方剂组（清热解毒方、软坚散结方）,DMEM培养基阴性对照组,将各组细胞培养至48h后做如下检测:（1
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目的:观察清热解毒方与软坚散结方对人肺腺癌A549细胞的生长、增殖和凋亡的影响,进而对两种中药方剂对A549细胞凋亡的影响进行比较,并观察Bcl-2 mRNA在A549细胞中的表达情况。方法:将人肺腺癌A549细胞进行体外培养,选择对数生长期、生长状态良好的A549细胞随机分为3组:两种不同功效中药方剂组（清热解毒方、软坚散结方）,DMEM培养基阴性对照组,将各组细胞培养至48h后做如下检测:（1）通过CCK8法检测不同浓度两种不同功效中药方剂对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制情况,并分别计算出清热解毒方与软坚散结方的IC50值;（2）通过倒置相差显微镜观察两种不同功效中药方剂对人肺腺癌A549细胞生长状态及形态学变化;（3）Hoechst33258染色观察各组A549细胞凋亡的形态学变化;（4）通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测两种不同功效中药方剂对人肺腺癌A549细胞的细胞凋亡率变化;（5）通过实时荧光定量（RT-PCR）检测两种不同功效中药方剂对人肺腺癌A549细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达影响。结果:（1）CCK8法结果显示:不同浓度清热解毒方与软坚散结方作用于人肺腺癌A549细胞48h后,均呈剂量依赖性抑制人肺腺癌A549细胞的增殖。与阴性对照组比较,2.5mg/ml软坚散结方作用于A549细胞后吸光度下降,差异无统计学意义（P>0.05）,余不同浓度的两组中药方剂作用于A549细胞后吸光度均下降,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。清热解毒方和软坚散结方作用于A549细胞48h后的IC50值分别为11.313 mg/ml、23.874 mg/ml。（2）通过倒置相差显微镜观察显示,阴性对照组细胞:细胞生长旺盛,分布密集,走向趋于一致,细胞延展、扁平,呈多角形贴壁生长,有2-3个扁平而长的突起,细胞的细胞体饱满,细胞均质、透明,细胞一般有2-4个核仁,核膜、核仁轮廓明显,呈卵圆形且多居中。两组不同功效中药方剂组细胞:细胞增殖减慢,密度降低,细胞间隙增大,突起缩短,细胞体缩小,呈悬浮状态,细胞质减少,胞质中黑色颗粒增多。（3）Hoechst33258染色结果显示:清热解毒方与软坚散结方分别作用于A549细胞48h后,均能观察到致密颜色发白的凋亡细胞,核固缩、核碎裂明显,且细胞密度均低于阴性对照组。（4）Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术结果显示:清热解毒方、软坚散结方作用于A549细胞48h后,细胞凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）分别为8.66%、11.17%,与阴性对照组（3.53%）比较,两组不同功效中药方剂组细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义（P<0.01）,以软坚散结方细胞凋亡率增加最为明显。（5）实时荧光定量（RT-PCR）结果显示:与阴性对照组比较,清热解毒方与软坚散结方作用于A549细胞48h后均能不同程度下调Bcl-2 mRNA表达,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论:清热解毒方、软坚散结方均能不同程度地抑制人肺腺癌A549细胞的生长和增殖,并促进人肺腺癌A549细胞的凋亡,其中以软坚散结方的细胞凋亡率增加最为明显。此外,清热解毒方与软坚散结方均可不同程度的下调人肺腺癌A549细胞Bcl-2 mRNA的表达。
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