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研究背景:正常的妊娠,是母体免疫系统对带有父源抗原的胎儿产生的一种免疫耐受现象,这种耐受是由多种因素之间相互制约、相互调节产生的。近年生殖免疫学者对自然杀伤细胞(NK cells)和自然杀伤T细胞(NKT cells)在其中的作用给予更多关注。NK细胞、NKT细胞在妊娠期产生Th2的免疫平衡,当这种平衡被打破,即产生各种病理妊娠,并可能诱导产程的发动。人类分娩发动的机理至今仍是个迷,目前人们转向组织水平、免疫水平找寻分娩动因。母-胎界面免疫微环境由蜕膜中的免疫活性细胞及其分泌的细胞因子组成,母体的免疫调节系统包括抗原特异T细胞、调节性T细胞、NK细胞、γδT细胞、NKT细胞和细CTL细胞等,它们共同参与调节Th1/Th2平衡构成妊娠期Th2偏倚的免疫微环境,使母体对胎儿产生特异性免疫耐受以维持妊娠。已有的研究证实,NK细胞大量存在于妊娠早期蜕膜并与胎盘绒毛滋养细胞密切接触,在妊娠中发挥重要作用(其中70%左右为CD56brightCD16+NK细胞),而在妊娠晚期则明显减少。最近大量的研究发现,NKT细胞也参与了母胎耐受的形成。在人妊娠早期的蜕膜和外周血中存在NKT细胞的表达,人蜕膜组织富集TCRαβ+CDl61+非恒定型NKT细胞(也称为II型NKT细胞,non-iNKT cell)并表现了显著的Th2型偏移(产生IL-4),为机体提供一个Th2型的微环境,并发现该群NKT细胞具有免疫抑制作用。提示蜕膜组织中的非恒定型NKT细胞可能通过提供一个Th2型的微环境从而抑制胎儿排斥和维持正常的妊娠。本研究采用流式细胞荧光测定技术检测孕足月分娩发动前后外周血和蜕膜组织单个核细胞中NK细胞、NKT细胞构成及其表面NKG2D受体和NKG2A受体表达情况的变化,并进一步检测外周血单个核细胞中Th1/Th2平衡的变化及NK细胞、NKT细胞分泌Th1、Th2型细胞因子的情况,探讨其与分娩发动的关系,揭示NK细胞及NKT细胞在分娩发动中的作用。并进一步研究母胎界面趋化因子CXCR4的表达情况,试图探讨其与分娩发动前后NK细胞、NKT细胞重新分布之间的关系。研究外周血及蜕膜组织中NK细胞、NKT细胞的功能状态与分娩发动的关系,无疑从一个全新的角度诠释分娩这一生理现象,也为揭示妊娠时限异常疾病的发生机制及最终有效防治提供新思路,并为生殖免疫的发展提供新的理论依据。目的:检测分娩发动前后蜕膜及外周血中NK细胞及NKT细胞的含量、表型、Th1/Th2型细胞因子表达方面的变化,探讨NK细胞、NKT细胞独特的表型、功能与分娩发动之间的重要联系。检测母胎界面趋化因子CXCR4表达的变化,以发现其与NK细胞、NKT细胞在产程发动后在母胎界面重新分布及功能变化的联系。探讨母胎免疫平衡在分娩发动中的作用。方法:1)收取正常晚孕分娩组(实验组,32例)和正常晚孕剖宫产组(对照组,34例)壁蜕膜组织及同一人外周血,机械研磨法联合密度梯度离心法分离出蜕膜单个核细胞,单纯密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞,流式细胞术检测蜕膜及外周血中NK细胞、NKT细胞的含量及表型。2)流式细胞术检测正常晚孕分娩组和剖宫产组外周血中Th细胞平衡的变化及NK细胞、NKT细胞内Th1/Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4的表达。3)收取正常晚孕自然分娩及剖宫产孕妇壁蜕膜及胎盘组织(各6例),RT-PCR方法检测胎盘及壁蜕膜中CXCR4的表达情况。结果:1)与剖宫产组相比,分娩组蜕膜中NK细胞及NKT细胞的构成低于剖宫产组,外周血中NK细胞及NKT细胞构成高于剖宫产组(P<0.01),两组蜕膜中NK细胞构成均高于外周血(P<0.01)。2)蜕膜单个核细胞中,分娩组CD56+NKG2A+细胞、CD56+ NKG2D+细胞、NK细胞表面NKG2A、NKG2D受体表达均低于剖宫产组(P<0.05)。两组中NKT细胞表面NKG2A、NKG2D受体表达无显著差异(P>0.05)。3)外周血单个核细胞中,分娩组CD56+NKG2A+细胞构成、NK细胞表面NKG2A受体表达低于剖宫产组,(P<0.05)。CD56+NKG2D+细胞构成、NK细胞表面NKG2D的表达及NKT细胞表面NKG2A/NKG2D受体的表达高于剖宫产组,(P<0.01)。4)外周血单个核细胞中,分娩组外周血CD3+T细胞中Th1细胞含量高于剖宫产组(P<0.01),Th2细胞含量与剖宫产组无差异(P>0.05)。分娩组NKT细胞、NK细胞分泌IFN-γ的能力高于剖宫产组。分娩组NKT细胞分泌IL-4的能力高于剖宫产组,NK细胞分泌IL-4的能力与剖宫产组无显著差异。5)两组胎盘、胎膜均有CXCR4表达,剖宫产组胎盘、胎膜上CXCR4表达相对高于分娩组。结论:分娩发动后外周血及蜕膜中NK细胞、NKT细胞的构成、表型及功能有变化。分娩组蜕膜中NK细胞、NKT细胞含量降低,外周血中含量增加且倾向于Th1偏倚。外周血中NK细胞、NKT细胞中NKG2D受体表达增高,提示其功能活化与分娩发动有一定联系,并且这种变化与趋化因子存在一定关联。在分娩发动过程中免疫系统存在变化,不仅表现在全身,在母胎界面也有明显变化,免疫平衡的改变可能在分娩发动中起着重要作用。