研究目的建立Con A诱导小鼠急性肝损伤模型,应用协带白细胞介素-35(Interleukin-35,IL-35)表达基因的慢病毒转染间充质干细胞(MSC),利用外源表达IL-35的MSC对小鼠肝损伤进行基因治疗,通过转氨酶变化及肝脏病理改变来评估IL-35-MSC对肝损伤的治疗效果。研究方法从脂肪组织分离培养获得间充质干细胞,应用IL-35表达质粒转染293T细胞获得表达IL-35的病毒初液;将表达IL-35的病毒初液感染MSC,从而获得IL-35基因修饰的间充质干细胞。建立Con A诱导小鼠急性肝损伤模型,治疗组给予IL-35-MSC;对照组给予MSC;空白组给予生理盐水。评估不同治疗方式下对小鼠急性肝损伤后生存状态,肝脏转氨酶变化及肝损病理的改变,进而确定治疗效果。研究结果1.脂肪来源间充质干细胞获取成功,初代培养需7-10天,传代培养则为两天,活性最好为3-6代细胞。2.表达IL-35的慢病毒载体成功构建,转染后48小时可以获得具有感染功能的病毒初液。3.成功应用Con A构建小鼠肝损伤模型,最佳浓度为15mg/g。4.用1000ul/2500ul浓度的病毒初液对MSC的感染率为25.4%,注入细胞数5×10~5个细胞最佳。5.观察生命状态均在模型构建后出现精神萎靡、懒动、低温、颤栗。小鼠注射Con A后血清ALT,6h开始明显升高24h达到峰值,48h后明显恢复。18h结果显示Con A组2664.63±28.795,MSC组948.67±137.88,IL-35-MSC组477.41±185.71;24h结果显示Con A组3536.62±117.94,MSC组2388.53±671.38,IL-35-MSC组709.69±212.72,治疗组ALT水平明显低于其它两组,P<0.05。72小时统一处死存活小鼠,解剖观察肝脏出现缺血损伤,并在HE染色后镜下病理改变IL-35-MSC治疗组的损伤程度明显轻于其它两组。研究结论1.脂肪源的间充质干细胞的培养关键在于原代细胞的培养,传代过多细胞易出现变异活性下降,因此在3-6代实验最佳。2.慢病毒可以作为有效载体将IL-35对MSC进行基因修饰。3.IL-35-MSC具有治疗免疫因素引起肝损伤的作用,IL-35-MSC能通过调节发生肝损伤小鼠机体免疫细胞活性,显著减轻了肝损伤的程度,调控肝细胞凋亡,使肝衰竭的得到有效抑制。