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目的:探讨外源性硫化氢对人胚肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast,HFL-F)转化的影响及其可能的机制。方法:体外培养HFL-F MRC-5细胞至对数生长期,先加入TGF-β1(10μg/L)作用12h后,再加入不同浓度的硫氢化钠(H2S的供体)作用一定时间,采用MTT比色法检测细胞的增殖,绘制12h、24h、48h时间点的增殖曲线图,测定Na HS对肺成纤维细胞增殖的影响,挑选出Na HS最合适的作用浓度。把接种在培养瓶里的细胞随机分为4组:对照组:细胞使用MEM/NEAA培养基加10%FBS(Hyclone)培养;TGF-β1组:正常培养的HFL-F MRC-5细胞加入TGF-β1(10μg/1)作用24h;Na HS组(H2S供体):用最适浓度的硫氢化钠加入HFL-F MRC-5,刺激24h;Na HS+TGF-β1组:用TGF-β1(10μg/l)预先处理HFL-F MRC-5 12h,再加入最适浓度硫氢化钠共孵育24h。以上各组细胞,用Western blot法检测ρ-Smad2/3和Smad3蛋白在0min、15min、30min及60min的表达水平,检测24小时后α-SMA、I型胶原蛋白的表达水平。应用倒置相差显微镜观察正常细胞和加入TGF-β1(10μg/1)刺激后的细胞形态学变化,并在0h、12h、24h、48h照相记录。结果:1.通过倒置相差显微镜可以看到,TGF-β1刺激后,肺成纤维细胞从多突的纺锤形或星形结构,逐渐转化为扁平状纤维结构的肌成纤维细胞,随着时间的延长,细胞增殖明显。2.与对照组相比,TGF-β1刺激肺成纤维细胞12h后,加入不同浓度的硫氢化钠(H2S的供体),细胞的增殖出现不同程度的减弱;与12h、48h组相比,24h组存活率最大,提示硫氢化钠在50μmol/L~1200μmol/L浓度时对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞增殖有抑制作用,且存在一定的时间和剂量相关性。3.与TGF-β1组比较,Na HS组及TGF-β1+Na HS组肺成纤维细胞α-SMA、I型胶原蛋白明显减弱,而Na HS组α-SMA、I型胶原蛋白的表达最低,说明外源性硫化氢对人胚肺成纤维细胞α-SMA和I型胶原蛋白的表达有下调作用,能够抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。4.与正常对照组比较,Na HS组肺成纤维细胞ρ-Smad2/3无差异性,而TGF-β1组肺成纤维细胞ρ-Smad2/3蛋白较Na HS+TGF-β1组表达明显增多;与15min、60min相比,30min时间点肺成纤维细胞ρ-Smad2/3蛋白表达的更明显。5.与对照组相比,Na HS组、TGF-β1组和Na HS+TGF-β1组肺成纤维细胞Smad3表达均上调,TGF-β1组Smad3蛋白表达上调更明显。在同一试验组中,15min时间点较30min、60min时间点肺成纤维细胞Smad3蛋白表达上调更明显。在30min时间点,Na HS+TGF-β1组和Na HS组较TGF-β1组Smad3蛋白表达水平明显降低。说明硫氢化钠能够下调TGF-β1/Smad信号通路中ρ-Smad2/3、Smad3蛋白的表达,且对ρ-Smad2/3、Smad3蛋白的表达调节具有一定的时间相关性。结论:外源性硫化氢可以抑制肺成纤维细胞的增殖,减少胶原蛋白的合成,其可能机制与通过阻断TGF-β/Smad信号转导通路有关。