池塘养殖中华绒螯蟹细菌性疾病的病原鉴定及流行病学调查

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中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)俗称河蟹,是中国的名贵淡水蟹。已从患病的蟹体内分离出多种致病细菌:气单胞菌(Aeromonassp.)、假单胞菌(Pseudomonassp.)、产碱杆菌(Alcaligenessp.)、黄杆菌(Flavobacteriumsp.)、利斯顿氏菌(Listonellasp.)、弧菌(Vibriosp.)、芽孢杆菌(Bacillussp.)、巴斯德菌(Pasteurllasp.)、粘液球菌(Myxobacteriasp.)等。它们可引起中华绒螯蟹的腹水病、甲壳溃疡病、颤抖病、水肿病、肠炎病、败血病、黑鳃病、烂肢病、弧菌病、肝坏死病等。中华绒螯蟹细菌性疾病发病快、死亡率高,造成较大的经济损失,为了研究其发生的原因、病原菌种类和流行规律,2011年和2012年的4至10月份,笔者对安徽省宣州区、芜湖县、无为县和当涂县的多个养殖池塘进行了调查。结果如下:1.病蟹或壳软,打开背甲后有恶臭,鳃灰黑色、粘液多,口吐紫色泡沫,有腹水,胃肠空,肝脏溃烂。跟据病蟹的症状判断,本次调查的中华绒螯蟹患细菌性疾病。2.从病蟹的肝脏和肌肉组织先后分离、纯化出35株细菌,经感染试验证实,分离自当涂县和芜湖县患病中华绒螯蟹的2株细菌(DT9和WH21)具有致病性。被感染的健康蟹表现出“肝坏死”的症状。在回归感染24h后,可致健康蟹全部发病死亡。3.病原菌菌落在普通琼脂培养基上的特征表现为淡黄色、圆形(直径为2-2.5mm)、中央突起、边缘整齐、表面光滑湿润。革兰氏染色后镜检,均为阴性杆菌,两端钝圆,长短不一,偶可见有个别长丝状菌体,散在排列。与气单胞菌属特征吻合。4.生化鉴定显示分离菌株均为发酵型代谢,氧化酶阳性,在6%氯化钠肉汤中不生长,对O/129磷酸盐出现耐药性,发酵葡萄糖产酸产气。进一步根据气单胞菌“种”鉴定八项指标初步确定菌株DT9是维氏气单胞菌,菌株WH21是嗜水气单胞菌。5.对2株病原菌的16SrRNA基因序列进行PCR扩增,测序结果2株病原菌16SrRNA基因长度均为1443bp。DT9菌株与维氏气单胞菌参比株(A.veronii,FJ490063)的同源性为99.2%;WH21菌株与嗜水气单胞菌参比株(A.hydrophila,AB680307)的同源性为99.9%。确定DT9为维氏气单胞菌,WH21为嗜水气单胞菌。6.药敏试验结果:DT9对氟哌酸、氟苯尼考、多粘霉素B、丁胺卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素等有不同程度的敏感;WH21对氟哌酸、氟苯尼考、多粘霉素B、丁胺卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素等有不同程度的敏感。7.本次调查的安徽省中华绒螯蟹细菌性疾病主要有“腹水病”、“甲壳溃疡病”、“黑鳃病”、“肝坏死病”等。每年从4月份开始零星出现,随后发病率呈上升趋势,8月份发病率达到全年的高峰期,9月份发病率显著降低,10月份基本停止。
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