生脉注射液对兔颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响

来源 :贵州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lilei1984lilei
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目的:本研究使用生脉注射液干预兔颈总动脉球囊损伤术后血管内膜增生模型,探讨生脉注射液对兔颈总动脉内膜增生的影响,为兽医临床使用生脉注射液防治动物心血管疾病提供理论依据。方法:雌性新西兰大白兔,体重在2.0~2.5 kg,准备30只随机分为5组,每组6只,分别为假手术组、模型组、生脉低剂量组(0.74 m L·kg-1·d-1肌注)、生脉高剂量组(1.48m L·kg-1·d-1肌注)和辛伐他汀组(2.2 mg·kg-1·d-1口服)。除假手术组外,余下各组均行球囊损伤术建立兔颈总动脉内膜损伤模型,损伤完成后立刻使用0.4%台盼蓝染色液静脉注射观察血管内膜染色情况,判断球囊是否造成兔颈总动脉内膜损伤。手术当天开始用药干预,连续用药14 d,每天定时用药1次,假手术组不给药。术后第15 d空腹耳缘静脉采血收集血清,牺牲试验兔,把损伤段血管从原切口处取出福尔马林灌注固定并制备病理切片,PCNA免疫组化染色;HE染色;用Case Viewer软件和Image-Pro Plus 6.0软件分别测量损伤段血管IT、MA、IA的值,并计算IA/MA的比值;ELISA法测定血清TNF-α、PDGF和IL-6的含量。结果:试验结果如下:1、0.4%台盼蓝染色结果结果显示,同一只试验兔左侧(未损伤侧)颈总动脉内壁未被蓝染,右侧(损伤侧)颈总动脉内壁被均匀的染成深蓝色,说明球囊损伤术已使兔颈总动脉内壁均匀损伤。2、血管组织学观察在光学显微镜下,假手术组的正常颈总动脉内膜未增厚,外膜、中膜和内膜三个边界清晰可见;模型组内膜增厚明显,增生内膜明显可分为两部分,靠近内弹力板侧的平滑肌细胞排列有明显向管腔侧迁移的趋势,细胞核体积变小,靠近管腔侧的平滑肌细胞排列接近中膜平滑肌细胞的排列,细胞核体积增大,管腔明显变窄,细胞外基质含量增多;生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组三组均出现不同程度的内膜增生,生脉低剂量组增生内膜平滑肌细胞排列混乱,有明显向管腔侧迁移的趋势,管腔狭窄程度比模型组低;生脉高剂量组和辛伐他汀组血管内膜增生不明显,少量的平滑肌细胞向内膜迁移。3、血管内膜厚度、内膜面积、中膜面积和内膜面积/中膜面积测量结果显示:模型组颈总动脉内膜增厚明显,内膜增厚至160.39±18.42μm、内膜面积为0.40±0.05 mm2、内膜面积/中膜面积为0.95±0.15,兔颈总动脉行球囊损伤术14 d后,血管内膜增厚显著,管腔变窄,模型建立成功;生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组的内膜厚度、内膜面积和内膜面积/中膜面积的比值均比模型组降低,内膜厚度分别为:121.76±11.87μm、63.04±9.35μm、56.48±9.35μm;内膜面积分别为:0.22±0.2mm2、0.17±0.02 mm2、0.14±0.02 mm2;内膜面积/中膜面积的比值分别为:0.51±0.08、0.39±0.03、0.36±0.07;中膜面积在假手术组、模型组、生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组差异不明显,说明球囊损伤术后14 d生脉注射液能明显抑制兔颈总动脉内膜增生,且随着生脉注射液浓度的增加兔颈总动脉内膜增生程度下降,生脉高剂量组内膜增厚程度稍大于辛伐他汀组,但相差不多。4、生脉注射液对PCNA阳性表达的影响光镜下观察,假手术组、模型组、生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组PCNA阳性细胞比率分别为:(12.00±1.49)%、(94±3.06)%、(54.67±6.20)%、(24.01±8.21)%、(18.98±3.22)%,球囊损伤术后14 d,生脉低剂量组和生脉高剂量组颈总动脉内壁PCNA含量显著低于模型组,差异具有统计学意义,且随着生脉注射液浓度的升高PCNA在颈总动脉内壁的表达降低,说明生脉注射液能够抑制血管中膜平滑肌细胞的异常增殖。5、生脉注射液对兔血清中TNF-α、IL-6、PDGF含量的影响球囊损伤术14 d后,ELISA结果显示,模型组血清中TNF-α、IL-6和PDGF浓度均显著比生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组低。模型组、生脉低剂量组、生脉高剂量组和辛伐他汀组血清中TNF-α的含量分别为:1005.22±16.02 pg/ml、812.89±26.41pg/ml、754.59±25.85 pg/ml、749.47±10.31 pg/ml;IL-6的含量分别为:212.80±15.90 ng/L、195.21±29.54 ng/L、171.55±20.89 ng/L、163.54±13.10 ng/L;PDGF的含量分别为:58.74±2.74 ng/L、47.70±5.54 ng/L、45.98±2.04 ng/L、45.64±5.19 ng/L。说明生脉注射液能降低球囊损伤术后14 d血清中炎症因子TNF-α、IL-6和增殖因子PDGF的含量,推测生脉注射液可能是通过降低炎症因子和生长因子在血液中的表达从而抑制球囊损伤后的血管内膜增生。结论:成功用球囊损伤术建立兔颈总动脉内膜增生模型;生脉注射液可以抑制兔颈总动脉球囊损伤术后发生的血管内膜增生,并且随着生脉注射液浓度的升高血管内膜增厚的程度降低。
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