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目的：本研究通过建立海人酸难治性癫痫大鼠模型,采用宁痫颗粒、卡马西平单独或联合治疗,观察海人酸难治性癫痫大鼠行为学和脑电图变化,从炎症因子、凋亡及耐药基因探讨宁痫颗粒抗癫痫作用机制,为中西医结合治疗难治性癫痫提供了新的治疗方法。方法：第一部分：采用海人酸海马CA3区微量注射的化学点燃方法制作模型,通过苯妥英钠及脑电图筛选成功制作慢性难治性癫痫模型36只,随机分为模型组、卡马西平组、宁痫颗粒组、宁痫颗粒低、中、高剂量联合卡马西平组,再加假手术组,共7组,每组6只。第二部分：观察各组大鼠治疗前后体重、癫痫发作的次数、发作平均持续时间、被抓时平均防卫级别、发作级别、SRS发作总时间,并对各组大鼠治疗前后进行脑电图监测。第三部分：难治性癫痫大鼠模型每组6只,分组治疗后与假手术组6只,予心尖灌注生理盐水后取脑,在4%多聚甲醛中固定,常规制备石蜡切片(含皮层和海马)。HE染色观察海马各区及颞叶皮层神经元形态结构的改变,免疫组化观察海马及颢叶皮层c-fos、caspase-3的表达。第四部分：按上述治疗分组后股动脉采血,收集各实验组大鼠血清采用免疫酶联法(Elisa法)测定各实验组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。第五部分：按上述治疗分组后大鼠在10%水合氯醛麻醉下取脑,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠脑内海马MDR1mRNA表达,western-blot法检测其相应P-gp表达。结果：第一部分：采用海马局部注射海人酸及药物筛选后成功制作成难治性癫痫大鼠模型。第二部分：治疗后大鼠体重比较：与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组体重明显增加,有显著性差异(P<0.05)：大鼠治疗前后发作平均持续时间比较：与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平发作平均持续时间明显减少,有极显著性差异(P<0.01)：大鼠治疗前后被抓时的平均防卫反应评分：与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组被抓时平均防卫反应评分明显减少,有极显著性差异(P<0.01)；大鼠治疗前后平均发作级别的变化：与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组平均发作级别减少,有极显著性差异(P<0.01); SRS发作总时间变化：与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组SRS发作总时间明显减少,有极显著性差异(P<0.01)。脑电图显示宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组大鼠痫性放电受到抑制。第三部分：c-fos表达：假手术组大鼠海马区组织切片中可见少量c-fos阳性细胞表达,模型组海马区c-fos阳性细胞的表达明显增多。与卡马西平组比较,宁痫颗粒低、中、高剂量组联合卡马西表达明显减少,有极显著性差异(氏0.01)；caspase-3表达：与卡马西平组比较,宁痫颗粒低、中、高剂量联合卡马西组表达减少,有显著性差异(P<0.05)。第四部分：IL-1p表达：与卡马西平组比较,宁痫颗粒低剂量联合卡马西平组大鼠血清IL-1p含量显著降低(P<0.05),宁痫颗粒中、高剂量组联合卡马西平大鼠血清IL-6含量极显著降低(P<0.01)；IL-6表达：与卡马西平组比较,宁痫颗粒低剂量联合卡马西平组大鼠血清IL-6含量显著降低(尸<0.05)；宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组大鼠血清IL-6含量极显著降低护<0.01)；TNF-α表达：与卡马西平组比较,宁痫颗粒低、中、高剂量联合卡马西平组大鼠血清TNF-α含量极显著降低(P<0.01)。第五部分：MDR1mRNA表达：与模型组比较,其余各组大鼠脑组织MDRI含量极显著降低(P<0.01)；与卡马西平组比较,宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组大鼠脑组织MDRI含量极显著降低(P<0.01); P-gp表达：与模型组比较,宁痫颗粒高剂量联合卡马西平组大鼠脑组织P-gp蛋白表达极显著降低(P<0.01),宁痫颗粒低、中剂量联合卡马西平组表达显著降低∽<0.05)。结论：1.本研究成功建立了大鼠海马局部注射微量海人酸后经癫痫持续状态及药物筛选成为难治性癫痫模型,操作相对简单,成功率高,节约成本,为后续研究打下较好的基础。2.宁痫颗粒低、中、高剂量联合卡马西平组能明显减少各组致痫大鼠的痫性发作平均持续时间、被抓时的防卫反应评分、SRS发作总时间,并降低痫性发作程度,比单用中药或西药有明显改善。脑电图显示宁痫颗粒中、高剂量组联合卡马西平组大鼠痫性放电明显受到抑制,只见少量棘波或尖波,而以宁痫颗粒高剂量联合卡马西平组出现最少。3.宁痫颗粒低、中、高剂量联合卡马西平组可以明显降低c-fos、caspase-3基因的表达,抑制细胞凋亡,达到保护神经细胞的作用；推测宁痫颗粒可能作用于细胞凋亡途径的多个靶点,与卡马西平有协同增效的作用,但凋亡基因的表达并未随中药剂量的增加而下调。4.IL-1β、IL-6、TNF-α共同参与了免疫反应,其水平的变化间接反映了脑组织损伤程度。宁痫颗粒中、高剂量联合卡马西平组炎症因子的表达明显低于卡马西平组(P<0.01),表明宁痫颗粒联合卡马西平具有一定的免疫抑制作用,比单用卡马西平疗效显著,进而说明两者联合具有协同作用,对癫痫有一定的治疗作用。5.宁痫颗粒联合卡马西平具有一定的抑制MDR1mRNA/P-gp的药物转运体功能,可以下调MDR1mRNA/P-gp表达,且存在一定的量效关系。