论文部分内容阅读
本文以不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中的毛囊作为实验材料,利用不同的提取方法,不同pH值的IPG胶条以及不同的上样量,探索适用于细毛羊皮肤组织的双向电泳体系,建立细毛羊皮肤组织的2-DE凝胶图谱,挖取差异明显的蛋白点进行质谱鉴定,鉴定肽指纹图谱并在数据库中比对,结合生物信息学知识分析这些差异蛋白与羊毛纤维直径的内在联系,这对提高羊毛品质具有重要的实际意义。本研究主要获得了以下结果:1.比较TCA沉淀法,酚抽提法以及TCA/丙酮法,得出TCA/丙酮法最适合细毛羊毛囊组织总蛋白质的提取。2.选择用pH3-10的IPG胶条分离皮肤组织中的毛囊总蛋白,摸索蛋白点主要集中的范围。实验中使用pH4-7,长度为18cm长的IPG线性胶条,这样有助于将皮肤组织中的毛囊总蛋白在2-DE图像上整体分布开。比较每根胶条样品上样量分别为80μL、100μL、120μL,最后选择上样量为100μL时图谱最清晰。上样量为100μL,选择18cm,pH4-7的线性IPG胶条,得到质量较好的双向凝胶电泳图谱。3.对两岁的超细型、细型细毛羊毛囊蛋白质2-DE凝胶图谱进行分析,检测出其中除差异点7、30、31、34、35出现下调,其余蛋白均为上调。并且从图上可以看出相对于超细型,细型中出现的四个蛋白质均为下调。在下调蛋白中只有差异点7为超细型细毛羊中出现的差异蛋白。对四岁的超细型、细型细毛羊毛囊蛋白质2-DE凝胶图谱进行分析,检测出表达丰度上在2倍以上的38个差异蛋白。其中除差异点36、57、58出现下调,其余蛋白均为上调。这三个差异点均在细型细毛羊中出现。4.不同纤维直径的细毛羊毛囊蛋白质差异比较得到73个质谱鉴定结果以及73套肽质量指纹图谱,在NCBI数据库进行搜索,匹配有意义的蛋白质,进行综合分析,成功鉴定73种不同的差异表达蛋白。不同年龄的超细型细毛羊毛囊蛋白质差异比较得到33个质谱鉴定结果以及33套肽质量指纹图谱,其中有12个与不同纤维直径的细毛羊差异蛋白组重复。本文将94个蛋白质按其主要功能属性划分为8类。